ACEA NovoCyteTM 快速操作指南 (2014.02)流程开机QC?测试新建实验荧光补偿采集样本分析数据关机开机轻按仪器前面板电源键 启动仪器，在配套电脑上打开 NovoExpressTM ，待仪器初始化完成，软件状态栏将显示“就绪”，即可进行下一步操作。QC 测试1制备NovoCyteTM QC微球悬液。 ??????????????补偿前??????????????????补偿后? ??补偿调节的过程也可以通过点击菜单“开始”→“当前补偿”调出当前样本的补偿矩阵，不断调整溢出矩阵中相应单元格的补偿系数来实现。，根据软件提示完成QC测试。2点击主菜单“仪器”→“QC测试”3QC测试所有项目结果均为 Pass 时，可进行下一步操作。新建实验1点击主菜单“文件”→“新建”→“新建实验”，建立新的实验文件。2用以下多种方式新建实验样本或标本：? ??在“实验管理”面板，右键点击“实验文件名.ncf”，在本实验文件下新建标本。右键点击“标本”，在选中的标本下新建样本。? 如??果已有模板文件，点击主菜单“文件”→“新建”→“从模板新建”，将新建有相同模板的标本或样本。3点击主菜单“文件”→“保存”，保存创建的实验文件。采集样本1在“实验管理”面板，双击样本，使之成为当前样本（红色箭头指示 2设置采集条件：）。荧光补偿 如果未保存文件，在采集该实验第一个样本时，软件将自动提示保存。? ??设置采集样本使用的“参数”，包括选择采集通道并定义别名，选择采集参数“面积”和/或“高度”。? 设置实验“停止条件”。? 设置实验“样本流速”。 参数多少会影响最终文件大小。 时间允许建议使用低速，可提高信号分辨率。1.自动荧光补偿1准备各个荧光参数的单染样本和未染色对照样本。 2点击菜单“开始”→“自动补偿”，弹出“新建自动补偿”对话框，进行自动补偿条件设置。3选择需要使用的样本，并点击“确定”。软件将自动新建“补偿标本”。4逐管采集单染样本，软件自动计算荧光补偿。5将自动计算的荧光补偿复制粘贴到（或按住鼠标左键拖拽到）实验样本。? ??设置“阈值”。FSC-H大于100,000的阈值条件，可满足大部分原代细胞和细胞系的实验需要。细菌和血小板等特别小的细胞则建议将阈值设为FSC-H大于10,000。结合第二阈值条件可以更好地消除细胞碎片对实验的影响。3将样本管充分混匀，置于样本架。4点击“采集”按钮 执行样本采集。此时样本针会向下运动至样本管内，吸取一定体积2.手动荧光补偿两种方式手动调节荧光补偿：? ??需要补偿的参数两两做密度图，点击快速补偿按钮??，拖动快速补偿滚动条，使某一荧光单阳性细胞与阴性细胞在另一荧光通道的荧光强度相等。逐个调节直到所有参数之间的补偿完成。的样本后收回。当前正在采集的样本在“实验管理”面板中以绿色箭头指示（ 样本采集过程中，请勿将手伸到样本针下方，请勿遮挡样本针位置。）。采集条件可以通过导入已有同类型实验的“仪器设置”模板的方式实现。1 / 2ACEA NovoCyteTM 快速操作指南 (2014.02)
分析数据1.画图1选择点击 2.设门1点击需要设的门的类型，（散点图）、 形显示当前样本的数据。图形的放大和缩小。（密度图）、 （柱状图）或 （等高线图）图标做图。图2双击门的标签可以对门进行重命名。 区域门， 矩形门， 椭圆门， 多边形门， 十字门， 逻辑门， 双区域门，在图形上点击拖动，设置门的区域，圈出感兴趣的目标细胞群。2? ??点击“放大”，在图形上拖动鼠标，可将图形放大到鼠标拖动的范围。在坐标上拖动鼠标，可仅在该坐标方向放大图形。? ??点击“缩小”，在图形上点击鼠标，可将图形缩小，多次点击，逐步缩小。在坐标上点击，可仅在该坐标方向缩小图形。? 点击“自动范围”? 点击“全范围”，自动将图形放大到所有细胞都能以尽可能大的方式显示。，自动将坐标设置为可显示的最大范围。3右键点击图形上方的样本名称，从下拉菜单中选择该图需要应用的门。通过逻辑门可以灵活设定已有门的各种组合。3.导出/导入模板? 导??出/导入模板：在“实验管理”面板右键点击标本或样本名称，选择“导出”→“做为模板导出”或者“导入”→“导入模板”。? ??模板应用：在标本或样本名称上按住鼠标左键，拖动到另一个标本或样本名称，可直接实现模板应用。 NovoExpressTM 中，样本节点下的“仪器设置”、“荧光补偿”、“报告”和“分析”，可以捆绑在一起作为模板应用到其他样本，也可以单独作为模版应用。标本模板是属于该标本的所有样本模板的总和。在NovoExpressTM中，每个样本都有独立的分析，数据和分析保存在一个实验文件（*.ncf）中。放大图形4.导出/导入FCS文件 示“仪器设置”中选择的所有参数。 ? ??导出FSC文件：在“实验管理”面板右键点击实验文件名称、标本或样本，选择“导出FCS文件”。 导出FCS文件时选择“自动”参数范围有助于FlowJo等第三方软件更好的选择合适范围显示图形。 在文件名或标本上点击，可快速将整个文件中或某个标本下所有样本的FCS文件导出。3右键点击坐标名称（例如：FSC-H），从下拉菜单选择该图需要显示的参数，该下拉菜单显? ??导入FSC文件：在“实验管理”面板右键点击实验文件名称、标本或样本，选择“导入FCS文件”。5.自动生成报告NovoExpressTM 拥有自动生成报告的功能，通过双击“实验管理”面板中标本或样本节点下的“报告”实现。关于该功能的详细描述，请参考《NovoExpressTM 软件说明书》“7 报告”。6.创建统计表格4荧光通道参数别名可以通过点击“仪器设置”面板中的参数“别名”进行修改。也可以左键点击图形坐标名称直接修改。5右键点击坐标轴，从下拉菜单选择坐标显示比例（线性、对数、双指数）和显示范围（自动NovoExpressTM 拥有统计表格功能。在“实验管理”面板中，右键点击“统计表格”选择“创建”创建统计表格。关于该功能的详细描述，请参考《NovoExpressTM 软件说明书》“5.6 统计表格”。关机轻按 NovoCyteTM 流式细胞仪前面板上的电源按钮 机流程结束后，电源自动切断，指示灯熄灭。 ，仪器将自动执行关机清洗流程。关范围、全范围）。也可以在“设置”中自定义显示范围。6点击图形右下角的箭头（ 或 ID051011），可以显示或隐藏统计数据。在图形上做的任何修改都只改变数据显示，不会改变数据本身。所有图形和统计数据均可以复制、粘贴到其他文档。系统维护关于系统维护的详细描述，请参考《NovoCyteTM 系列流式细胞仪使用说明书》“4 系统维护”。2 / 2
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