HPLC法测定注射用卡非佐米的含量
刘爱明，戚敏，王芳，徐玲玲，王本伟
【摘 要】摘要：目的 建立HPLC法测定注射用卡非佐米含量的方法。方法 采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，以水(含质量分数0.1%三氟乙酸)-乙腈(含质量分数0.1%三氟乙酸)(体积比50∶50)为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为220 nm，柱温为35 ℃，进样量为20 μL。结果 卡非佐米质量浓度在25～75 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 6)，平均回收率为99.7%，RSD为0.24%(n=9)。结论 本法操作简便，结果准确、可靠，可作为注射用卡非佐米的含量测定方法。 【期刊名称】广东药科大学学报 【年(卷),期】2017(033)003 【总页数】3
【关键词】蛋白酶体抑制剂； 高效液相色谱法； 注射用卡非佐米； 含量测定 多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是较常见的恶性血液肿瘤[1]，超过13%的血液肿瘤是由MM引起的[2]。自2013—2015年，MM的新增病例数和死亡人数逐年增加，超过所有癌症死亡人数的2%[3]。蛋白酶抑制剂显著改变了MM的治疗前景，使患者的存活率得到明显改善[4]。2012年，第2代蛋白酶抑制剂卡非佐米(carfilzomib，商品名Kyprolis，图1)作为治疗复发型和顽固型多发性骨髓瘤得到FDA的加速批准[5]。卡非佐米毒性低，毒副作用小，无耐药性问题[6]365，患者耐受性好，安全性高，临床可长期使用，有希望成为治疗MM的一线用药[7]。另外，卡非佐米和其复方组合对其他肿瘤都具有良好抑制作用，如肝肿瘤[8]，原发性巨球蛋白血病[9]，淋巴瘤[10]，乳腺癌
[11]等。
卡非佐米为白色固体，相对分子质量为719.91，能溶于甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯，难溶于水。目前，卡非佐米只有经静脉注射给药，制定快捷方便的注射用卡非佐米含量测定方法对评价其有效性及安全性尤为重要。目前，已有文献报道采用高效液相色谱法测定卡非佐米的稳定性[6]367-373和含量[12]。本文综合以上2个文献的方法，建立了测定注射用卡非佐米含量的HPLC法，结果表明方法简便、快速、准确，适用于注射用卡非佐米的质量控制。
1 仪器与试药
Agilent 1260高效液相色谱仪(美国Agilent公司),包括G1311C型四元输液泵，G1329B型自动进样器，G1316A型控温模块，G1314F型柱温箱和G1314F型紫外检测器。色谱工作站为Agilent LC。
卡非佐米对照品(江苏奥赛康药业股份有限公司自制，批号：S14112701，质量分数为99.7%)；注射用卡非佐米(江苏奥赛康药业股份有限公司，批号：150101、150102、150103，规格：60 mg/支)；水为超纯水；乙腈为色谱纯(美国Fisher公司)；三氟乙酸为色谱纯(美国MREDA公司)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)色谱柱；以水(含质量分数0.1%三氟乙酸)-乙腈(含质量分数0.1%三氟乙酸)(体积比50∶50)为流动相；流速为1.0 mL/min；检测波长为220 nm；进样量为20 μL，柱温为35 ℃。 2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 取卡非佐米对照品约10 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，
加50%(体积分数，下同)甲醇溶液适量，振摇使溶解，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，制成对照品储备液。精密量取上述储备液5 mL，置于10 mL量瓶中，加50%甲醇溶液定容至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得质量浓度为50 μg/mL的对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液 取出5瓶供试品的内容物，混合均匀，精密称取适量(约相当于卡非佐米10 mg)，置100 mL量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使溶解，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。 2.2.3 空白辅料溶液 按处方比例配制不含卡非佐米的阴性对照粉末，精密称取适量，按“2.2.2”项下方法制备空白辅料溶液。 2.3 专属性试验
分别精密吸取“2.2”项下对照品溶液、供试品溶液、空白辅料溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图2。可见，供试品色谱峰与对照品色谱峰保留时间一致，空白辅料溶液无干扰。 2.4 线性关系的考察
精密量取“2.2.1”项下对照品储备液适量，用50%甲醇稀释制成质量浓度分别为25、40、50、60、75 μg/mL的对照品溶液，分别精密吸取20 μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定，以质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得线性方程Y=13.298X+14.066，r=0.999 6，结果表明卡非佐米质量浓度在25～75 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。 2.5 精密度试验
精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液20 μL，按“2.1”项下色谱条件连续进样6
HPLC法测定注射用卡非佐米的含量
