酸枣仁酸奶实验方案
张馨月
一、 为什么要研制酸枣仁酸奶？
据2002年全球睡眠调查显示，中国一万受调查人群中存在睡眠问题的达42.5%。由此而带来的影响是一半以上的人会在白天精神不振、打瞌睡，27.7%的人情绪不佳，38.9%的人白天活动受限。2011年美国睡眠基金会睡眠调查发现，许多美国人对自己的睡眠质量不满意，43%的人表示他们一周中极少或从未睡过一个好觉。据专家估计，到2020年全球大约有7亿多失眠者。调查表明，医生、记者、白领等高压力人群是睡眠问题高发人群，同时不少初高中学生也存在睡眠问题，可见睡眠问题分布广泛，值得重视。
由于中药治疗失眠比较繁琐，大多人选择西药。目前催眠药物主要有苯二氮卓类药物和非BDZ类药物，但是这两种药物有不少不良反应，如恶心、呕吐、噩梦、皮疹等，久服引起耐受、依赖等症状。
在中药中，酸枣仁养心益肝，用于神经衰弱、失眠、多梦和盗汗等的治疗。。杨玉玲等试验证明酸枣仁治疗老年人睡眠问题效果与苯二氮卓类药物差异不显著，但不良反隐明显低于苯二氮卓类药物。酸枣仁是药食同源食品原料，因而想要研制一种可以改善睡眠的保健酸奶——酸枣仁酸奶，希望通过食疗改善大众睡眠质量。
二、实验假设与理论依据
1.实验假设：酸枣仁酸奶可以改善睡眠。
2.理论依据：酸枣仁中含有酸枣仁皂甙A、B和黄酮等能够改善睡眠的有效成分；同时酸奶中的色氨酸和钙离子都是改善睡眠的辅助因子。
三、实验目标
1.研制酸枣仁酸奶，确定最佳工艺参数
2.测定酸枣仁酸奶中酸枣仁皂甙A、B和黄酮的含量，以证明酸枣仁酸奶的改善睡眠功能。条件允许的话，通过动物实验更能证明其是否具有改善睡眠功能。
四、实验对象、方法
1.实验对象：酸枣仁、酸奶、酸枣仁皂甙A、B、黄酮
2.实验方法：以鲜牛奶和酸枣仁粉为主要原料，白砂糖为调味剂，以保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌为发酵菌种，40℃发酵，制备酸枣仁酸奶；分光光度计法测定黄酮含量，液相色谱法测定酸枣仁皂甙A、B含量。
五、实验内容 1．预实验
1.1酸枣仁酸奶的制备：
1.1.1酸枣仁浆液的制备：将酸枣仁磨成粉，按照1g酸枣仁粉/20ml水的比例混合，70℃超声提取10min，制成酸枣仁浆液（需做一个水浴加热对照组）。 1.1.2向纯净水中加入20%（V/V）酸枣仁浆液，8.5%白砂糖（W/V），12.5%乳粉，在20MPa条件下，采用均质机均质。之后90℃杀菌5min，并快速冷却至40 ～42 ℃，接入4%发酵剂（W/V）（发酵剂为保加利亚乳杆菌∶ 嗜热链球菌= 1∶ 1），在40℃发酵约4h（凝乳后，酸度约为75-90T，有少量乳清析出为止）。将凝乳在室温下放置至15-20℃之间，然后在4℃后熟24小时。 1.2 酸枣仁皂甙A、B的定量
1.2.1对照品溶液的制备：分别精密称取酸枣仁皂苷A、B对照品10.0mg，转移到100ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀至完全溶解，备用。 1.2.2发酵前试样制备：取酸枣仁粉末约1 g，精密称定, 置索氏提取器中，加石油醚( 60~ 90 ℃) 90 ml，加热回流4 h, 弃去石油醚，药渣挥去溶剂后转移入圆底烧瓶中, 加入70%乙醇40mL, 加热回流提取3 h, 滤过, 药渣用70%乙醇5 ml洗涤, 合并洗液和滤液, 回收溶剂至干,，残渣加70% 乙醇溶解并转移至2mL量瓶中, 加70% 乙醇至刻度, 摇匀, 过0.45 μm微孔滤膜, 取滤液，备用。
1.2.3发酵后试样制备：将酸枣仁乳饮料1000ml分为5份，每份200ml于500ml分液漏斗中，加入100 ml 馏分为60~90 ℃石油醚萃取，经充分振摇并静置，弃去有机层，水层再加入90 ml 二氯甲烷萃取，经充分振摇并静置后分离，弃去二氯甲烷，5 份水层合并后水浴蒸干。残渣用30 ml 正丁醇的水饱和溶液分3 次萃取，每次萃取都要经充分振摇并静置后分离，将3 次萃取的正丁醇的水饱和溶液合并后，再用20 ml 5%的氢氧化钾分两次萃取正丁醇的水饱和溶液，每次萃取都要经
。
充分振摇并静置后分离，弃去下层碱液，将正丁醇溶液用旋转蒸发仪浓缩，将浓缩液在真空干燥箱中80 ℃减压干燥后置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶解，充分振摇后，用甲醇定容。用离心机(2000 r/min)离心5 min 上清液用0.45 μm 微孔滤膜过滤，备用。
1.2.4检测波长的确定：精密量取对照品溶液0.6mL 用甲醇定容于2 mL，以试剂空白为参比，在190～350 nm 波长范围内进行扫描。得到最大吸收波长A 1.2.5 高效液相色谱法参考条件：
-色谱柱：Kromasil-C18分析柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)； -流动相：乙腈溶液，乙腈（V）：水（V）=34：66 -流速：1ml/min -检测波长：A -柱温：20℃ -进样量：10μl
1.2.6标准曲线的制备：准确吸取0ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml对照品溶液于10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。准确吸取10μl各容量瓶中的标准溶液，分别注入液相色谱，记录峰面积。以注各样的质量浓度对峰面积绘制标准曲线。 1.2.7试样测定：准确吸取10μl试样注入液相色谱仪，以保留时间定性，以待测峰面积与标准品峰面积比较定量。
1.2.8加样回收率试验：分别称取6份酸枣仁酸奶样品（每份5g），精密加入一定量酸枣仁皂甙A、B对照品，按照1.2.2和1.2.6操作。
编号 1 2 3 4 5 6
加入量 (μg/g) 8 8 9 9 10 10
测得量 (μg/g)
回收率 (%)
平均值 (%)
RSD (%)
1.3酸枣仁酸奶中总黄酮的测定
酸枣仁酸奶实验方案
