高效液相色谱法测定阿莫西林颗粒中的高分子杂质
摘 要：目的：采用高效液相色谱法去测定阿莫西林颗粒中高分子杂质的方法。方法：在测定的过程中采用的是高效液相色谱的方法。色谱柱是当前比较常见的凝胶柱，流动相A是浓度为0.1mol/L，PH值为7.0的磷酸盐缓冲液。流动相B为水，流动相的流速为0.6-0.9ml/min，在测定中检测的波长为254nm。结果：阿莫西林颗粒中的杂质含量在0.1%以内。结论：高效液相色谱法在测定阿莫西林中杂质含量使具有灵活性高，准确性强和操作简便等多项优势，这种方法也值得大力的推广和应用。
关键词：高效液相色谱法；阿莫西林颗粒；高分子杂质
阿莫西林是一种半合成广谱青霉素，这种药物本身的酸性非常强，同时抗菌效果非常好，在临床上有着非常好的应用效果，所以也得到了广泛应用，和其他类型的抗生素相同，在阿莫西林应用的过程中，过敏反应是非常关键的一个问题，在研究中发现出现过敏反应是阿莫西林制剂当中含有非常多的杂质，所以要想减少过敏反应的影响，就一定要对产品当中的高
分子杂质进行有效的控制，本文主要采用高效液相色谱法对杂质进行测定。 1 仪器与试药
仪器：WatersHl'LC仪（美国Waters），1525泵，2487UV检测器，色谱工作站（WatersBreeze）。 试药：阿莫西林对照品（中国药品生物制品检定所，含量为86.20l0）；水为重蒸馏水；阿莫西林颗粒（商品名为再林，批号为031202、031203、031204，海南先声药业有限公司）；蓝色葡聚糖2000（Pharmacia公司）：其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件
色谱柱：SephadexG-10凝胶柱（不锈钢色谱柱，300mmx10mm），内填SephadexG-10凝胶，安玛西亚生物技术（上海）有限公司提供。流动相：以pH值为7.0的0.1mol/L的磷酸盐缓冲液（取21.85g，一二水磷酸氢二钠与6.08g二水磷酸二氢钠溶于水中制成1000mL，用氢氧化钠或磷酸调溶液的pH值至（7.0±0.1）为流动相A；以重蒸馏水为流动相B。在下述条件下进行测定：检测波长为254nm；流速为0.6-0.9mL/min；进样量为20μL。 2.2 系统适应性试验
在试验的过程中，研究人员采用蓝色葡聚糖2000ml的溶液对色谱柱的理论塔板数和拖尾因子进行测定，蓝色葡聚糖的浓度为1mg/ml，在试验的过程中将流动相A当做这一步骤采用的流动相。将流动相的流速控在0.6-0.9ml/min，检测的波长一定要控制在254nm。理论上的塔板数是1695，拖尾因子能够为0.86.试验当中我们精确的称取适量的林标准品两份，将二者分别放在容积为50ml的容量瓶当中，加入适量的重蒸馏水，对其进行溶解和稀释，一直到标准的刻度。两份对照品按照标准的方法将流动相B当成是试验中的流动相，将一份样品进行三次的连续进样，峰面积相对的偏差为0.38%，而将二者分别进样一针，两份峰面积的相对偏差达到了0.26%。 2.3 溶液制备
对照品溶液制备：精确称取20mg的阿莫西林对照品，将其放置在容积为50ml的容量瓶当中，采用流动相B对其进行溶解和稀释到容量瓶刻度的位置，将其当做是对照品溶液。
供试品溶液制备：取本品4袋，将其按照试验的要求研细，同时还要精确的称取适量的细粉，将其放置在容积为50ml的容量瓶当中，加入30ml的流动相A，采用超声溶解的方式，将其稀释到刻度的位置，
此外还要以适当的力度将其摇匀，用滤膜对其进行滤膜处理，将其当做供试品溶液。 2.4 测定方法
精确吸取供试品溶液20μl，将其注入到色谱仪当中，将流动相A当成流动相对其进行测定，对色谱图进行记录，此外还要量取20μl的对照品溶液，将其注入到色谱仪当中，将流动相B当做流动相进行测定，同时还要对色谱图进行全面的记录。其暴露的时间要在蓝色葡聚糖2000和阿莫西林主峰杂质的含量之间，这一区间内都能将其计为高分子的杂质，用外标法的方式五对供试品当中的阿莫西林高分子含量进行计算。
2.5 阿莫西林颗粒中高分子杂质的测定 使用上述色谱条件，对3批阿莫西林颗粒的高分子杂质进行了全面的测定，在测定的过程中采用阿莫西林当做对照，使用主成分对照的方式去评价当中的相关物质的含量，供试品当中杂质的含量都不超过0.2%，结果如表1所示。蓝色葡聚糖2000和样品的色谱图如图1所示： 表1 样品测定结果
A对照品溶液 B蓝色葡聚糖2000 C样品 图1 HPLC图
3 讨论
在试验的样品当中加入了质量分数为10%的碳酸钠溶液，所以阿莫西林比较容易出现聚合的现象，在采取自然的方式放置了3格小时之后，对其进行了在一次的测定，发现高分子杂质的含量增加了接近一倍。因此，样品完全溶解之后应该采取立即进样的方式，同时在每次完全溶解之后，样品只能进一针，在试验的过程中一定要对碳酸钠溶液的加入量进行严格的控制，这样就可以使得超声的时间有所延长，溶解也更为充分。
在对照品溶液进样的过程中，应该将水当成流动相，进样品溶液的过程中应该将磷酸盐缓冲液当成流动相，这样也就可以充分的保证对照品主峰的保留时间和样品的高分子杂质保留的时间具有高度的一致性。
到目前为止，阿莫西林及青霉素类抗生素的高分子杂质尚无标准品。以HPLC分析相关物质，在没有杂质对照品的情况下，《中国药典》采用主成分对照法评价相关物质的含量，故在参照相关文献的基础上，木研究采用自身对照法进行了测定，结果表明本法简便、易行，能有效地检测到阿莫西林颗粒中的杂质含量。
高效液相色谱法测定阿莫西林颗粒中的高分子杂质
