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(1)过程①需要的工具酶有 和__________________。后者的作用是恢复前者切开的 键。 (2)在番茄新品种的培育过程中，将目的基因导入受体细胞的方法叫做 。 (3)从图中可见，mRNAl和mRNA2的结合直接导致了__________________无法合成，最终使番茄获得了抗软化的性状。多聚半乳糖醛酸酶基因与抗多聚半乳糖醛酸酶基因是否为等位基因 。
(4)普通番茄细胞导入目的基因后，经③ 过程和④ 过程，然后诱导出试管苗，进一步培养成正常植株。
（5）如图是该目的基因表达过程中的一个阶段，图中3和4的核苷酸是否相同 理由
（6）请在下框中画出某DNA片段被切割形成黏性末端的过程示意图。
15：在进行DNA亲子鉴定时，需大量的DNA。PCR技术 （聚合酶链式反应）可以使样品DNA扩增，获得大量DNA克隆分子。该技术的原理是利用DNA的半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制（如下图，图中黑色长方形是引物）。在很短的时间内将DNA扩增几百倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。
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（1）图中的变性、延伸分别是指 、
。
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（2）假设PCR反应中的DNA模板为P，第一轮循环的产物2个子代DNA为N1，第二轮的产物4个子代DNA为N2，N1、N2中分别含有模板DNA单链的DNA分别有 、 个。若继续循环，该DNA片段共经过30次循环后能形成 个这样的片段。
（3）某样品DNA分子中共含3000个碱基对，碱基数量满足：（A+T）/（G+C）＝1/2，若经5次循环，至少需要向试管中加入 个腺嘌呤脱氧核苷酸。（不考虑引物所对应的片段）
（4）若下图为第1轮循环产生的产物。请在下面试卷空白处绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。
答案部分
1、A,B,C 略
2、A
使DNA变性因素很多，例如强酸强碱等，加热只是使DNA变性的因素之一。 3、D
DNA复制条件：模板，酶，能量，原料，实验室内还需要适宜的温度和PH。即D。
4、A,D
DNA聚合酶链式反应，需要引物，需要热稳定DNA聚合酶，需原料等。
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5、B
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热变性的DNA骤然冷却时，DNA不会复性，在缓慢冷却时可以复性;DNA的片段越大，复性越慢，DNA的浓度越大，复性越快，当将双股链呈分散状态的DNA溶液缓慢冷却时，它们可以发生不同程度的重新结合而形成双链螺旋结构，这现象称为“退火”。DNA复性温度受G+C含量影响而各不相同。
6、(1)DNA复制(2)使DNA两条链彼此分开 解旋 解旋( 3)100%(4)2 800
由图可知，高温变性的过程就是DNA在高温条件下解旋的过程，在生物体内则需要解旋酶的催化才能进行。低温复性时两个DNA分子都需要引物。每次低温复性时，引物都与两条单链DNA结合，进而形成双链DNA，所以所得DNA中均含3H。扩增3次一共形成了8个子代DNA片段，需游离的脱氧核苷酸数为(8-1)×400=2 800个。
7、(1)互补配对 反向平行 磷酸基团 3‘端 5 ’端到3’端(2)使两条链之间的氢键断裂 解旋酶(3)四种脱氧核苷酸 耐热的DNA聚合酶 单链DNA分子或RNA分子
DNA的两条链在碱基关系上表现为互补配对，在方向上表现为反向平行。通常将DNA含有磷酸基团的一端称为5’端，DNA聚合酶只能从引物的3’端连接脱氧核苷酸，故子链复制的方向是5’端到3 ‘端。在PCR技术中，95℃高温处理的目的是使两条链之间的氢键断裂，这一过程在细胞内通过解旋酶来实现。PCR技术中除需要模板DNA、引物、四种脱氧核苷酸外，还需要耐热的DNA聚合酶等条件，其中的引物是一种单链DNA分子或RNA分子。
8、(1)稀释涂布平板法(2)需要，因为需要判断培养基是否被污染(3) 1.61x子杂交
(1)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为稀释涂布平板法。(2)用稀释涂布平板法统计样本菌落数时需要设置对照组，通过设置对照组来判断培养基是否被污染。(3)如分别取0.1 mL已稀释
倍的水样
(4)高压蒸汽灭菌不可(5)PCR DNA分
分别涂布到四个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为161、155、158、170，由题意可知，每升原水样中大肠杆菌数为( 161+155+158+170)×
÷( 4x0.1x10-3)=l.61x
。(4)培养基一般用高压
蒸汽灭菌法灭菌，不可用加入抗生素的方法防止杂菌感染，因为大肠杆菌对抗生素敏感。(5)遗传物质扩增常用PCR技术，可用DNA分子杂交技术鉴定水中病毒的种类。
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9、(1)耐高温(2)引物对B
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本题考查运用PCR技术扩增目的基因的有关知识以及对图表的识别能力。(1) PCR技术扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶具有耐高温的特性。(2)引物对B中含c-c碱基对较多，可忍耐较高的复性温度。
10、(1)模板DNA双链解旋形成单链在DNA聚合酶的作用下，原料脱氧核苷酸聚合形成新的DNA链(2) 31 000(3)
如图
(1)变性的实质是DNA双链解旋；延伸是以DNA单链为模板，按碱基互补配对原则合成子链的过程。(2)由(A+T)／( G+C)= 1/2可知A:T:G:C=1:1:2:2，所以A的比例为1/6，在一个DNA分子中的数量为3 000x2x(l/6)=1 000(个)，5次循环形成的DNA数为32个，所以需要利用原料合成的DNA数相当于32-1= 31（个），至少需腺嘌呤脱氧核苷酸为31x1000= 31000（个）。(3)画图的关键是注意引物A、B的位置和所对应的模板链。 11、（8分）
（1）TaqDNA聚合酶， DNA模板 ，分别与两条模板链相结合的两种引物， 四种脱氧核苷酸。
（2） B ，其子代的遗传物质一半来自父亲，一半来自母亲（2分）,C、D。 略
12、（12分）（1）同种的限制性内切酶 DNA连接酶 （2）306 （3）胰岛B细胞 人工合成的基因中不含非编码区和内含子 （4）胰高血糖素（或肾上腺素） 略
13、（6分）(1)DNA或RNA （2）50%
(3)引物Ⅰ′自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效 （4）从子链的5′端向3′端延伸（5）100％（6）Taq 酶
基因扩增中引物通常是一小段DNA或RNA片段，第二轮中含引物II（或考题中的引物A）比例为3/4，第三轮中占7/8，即所有DNA片段中，只有一个片段不含引物II，故推测在第四轮中，含引物II（或引物A）的比例为15/16。与两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段所占DNA总数的比例为50%，由于题图中的引物A和引物B均不在该片段
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的端点，因此第一轮循环后，得到的两DNA片段中两条脱氧核苷酸链都不等长，通过自行绘图可推知，第二轮中亦不会出现等长的引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则： 1、引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
2、引物扩增跨度：以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
3、引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
4、避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
5、引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
6、引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。
PCR技术扩增DNA需加入特定的Taq酶。复制过程子链的合成方向是从子链的5′端向3′端延伸
14、
（1）限制性内切酶 DNA连接酶 磷酸二酯键 （2）农杆菌转化法 （3）多聚半乳糖醛酸酶 不是 （4）脱分化 再分化 (5) 不同 3是核糖核苷酸 4是脱氧核苷酸（6）
略
15、（1）模板DNA双链解旋形成单链
在DNA聚合酶的作用下，原料脱氧核苷酸聚合形成新的DNA链 （2）2 2 2 （3）31000 （4）见右图(2分，画对1个给1分)
30
略
2016年广西单招生物模拟试题：多聚酶链式反应扩增DNA片段
