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免疫印迹法检测在自身免疫性疾病ENA多肽抗体谱及临床意义
刘军锋 贾克刚 刘运德
【摘要】 目的 探讨免疫印迹法检测自身免疫性疾病ENA多肽抗体谱的临床应用价值。方法应用免疫印迹法对系统性红斑狼疮(SLE)、混合性结缔组织病(MCTD)、干燥综合征(SS)、弥漫性硬皮病(PSS)、多发性肌炎/皮肌炎
(PM/DM)、类风湿关节炎(RA)等140例自身免疫病患者进行可提取性核抗原(ENA)多肽抗体谱检测。一次性同时检测抗Sm、抗U1RNP、抗SSA、抗SSB、抗Scl2、抗JO21、抗rRNP、抗DM253、抗RA254、抗D′E等10种自身抗体。结果 6种疾病抗ENA依次为75.6%、90%、70%、50%、42.1%、25%,,上阳性结果,说明患者血清中含有多种自身抗体,ENA免疫印迹法检测ENA自身抗体操作简便、省时、特异性好、,可同时完成对10种自身抗体的识别和过筛,。
【关键词】 自身免疫性疾病; 抗体, 结缔组织病,,不易被及早发现,给患者带来很大痛苦。为了解自身抗体在患者血清中的分布与表达情况,探讨可提取性核抗原(extractablenuclearantigen,ENA)多肽抗体谱在自身免疫疾病诊断中的应用价值及意义,本组应用免疫印迹法检测140例自身免疫病患者血清中10种ENA多肽抗体,现将结果报道如下,以期对临床诊治有所帮助。 资料与方法
1.材料:(1)病例组:来自门诊与住院、经临床确诊的140例自身免疫病(均符合国内或国际各类有关风湿病诊断标准)
患者,其中女100例,男40例,年龄16～70岁。包括系统性红斑狼疮
(systemiclupuserythematosus,SLE)患者45例;混合型结缔组织病
(mixedconnectivetissuedisease,MCTD)患者20例;干燥综合征(Sfogren’ssyndrome,SS)患者10例;弥漫性硬皮病(penetratedsclerosis,PSS)患者6例;多发性肌炎/皮肌炎(polymyositis/dermatomyositis,PM/DM)患者19例;类风湿关节炎
(rheumatoidarthritis,RA)患者40例。(2)对照组:40例健康体检者,其中女28例,男12例,年龄14～68岁。
2.方法:抗ENA多肽抗体谱试剂盒购自广州万孚生物技术有限公司,严格按照说明书操作,可一次性同时检测抗Sm、抗U1RNP、抗SSA、抗SSB、抗Scl270、抗JO21、抗rRNP、抗DM253、抗RA254、抗D′E等10种自身抗体。 结 果
140例病例组患者和40例健康对照组ENA多肽抗体谱见表1,抗ENA单项或多项阳性自身抗体分布见表2。
1.表1显示SLE患者,抗ENA谱阳性34例,阳性率75.6%(34/45),其中抗Sm阳性率44.4%(20/45)、抗U1RNP阳性率26.7%(12/45)、抗rRNP阳性率8.9%(4/45);MCTD
患者,抗ENA谱阳性7例,阳性率70%(7/10),其中抗SSA阳
性率70%(7/10)、抗SSB阳性率40%(4/10);PSS患者,抗ENA谱阳性3例,阳性率50%(3/6),其中抗Scl270阳性率50%(3/6);PM/DM患者,抗ENA谱阳性8例,阳性率42.1%(8/19),其中抗JO21阳性率31.6%(6/19)、抗DM253阳性率10.5%(2/19);RA患者,抗ENA谱阳性10例,阳性率25%(10/40),其中抗RA254阳性率17.5%(7/40)。健康对照组未检出自身抗体。
2.表2显示6种自身免疫病均存在多种自身抗体,SLE患者两种以上(包括两种)自身抗体检出率为17.8%(8/45)、MCTD患者检出率为40%(8/20)、SS患者检出率为40%(4/10)、PSS患者检出率为16.7%(1/6)、PM/DM患者检出率为26.3%(5/19)、RA患者检出率为10%(4/40)。
讨 论
1.免疫印迹法是在抗原不同表位,从分子水平识别各种抗体所作用的抗原在蛋白多肽分子量上的差别、从抗原的蛋白多
患者,抗ENA谱阳性18例,阳性率90%(18/20),其中抗 U1RNP阳性率80%(16/20)、抗D′E阳性率35%(7/20);SS
作者单位:300457天津泰达国际心血管病医院检验科(刘军锋、贾克刚);300070天津医科大学医学检验学系(刘运德)
肽水平上识别不同抗核抗体的一项新技术[1]。在抗体检测的
特异性和敏感性上不仅比琼脂双向免疫扩散和对流免疫电泳方法高,而且能在一次检测中,可同时完成对多种抗体的识别和过筛,为临床能正确诊断与鉴别多种易混淆的自身免疫性疾病提供重要的实验室依据。本组采用广州万孚生物技术公司生产的免疫印迹法检测ENA自身抗体试剂盒可同时筛查、鉴别抗Sm、抗U1RNP、抗SSA、抗SSB、抗Scl270、抗JO21、抗rRNP、抗DM253、抗RA254、抗D′E等10种自身抗体。
2.检测结果显示,SLE、MCTD、SS、PSS、PM/DM、RA等6种自身免疫性疾病抗ENA谱阳性率分别为75.6%、90%、70%、50%、42.1%、25%;6种疾病分别以抗
Sm、抗U1RNP、抗SSA、抗Scl270、抗JO21、抗RA254检出率为最高;6种疾病中两种以上(含两种)自身抗体检出阳性率依次为17.8%、40%、40%、16.7%、26.3%、10%。实验结果提示,6种自身免疫病除出现单项自身抗体阳性外,均出现了两种以上(含两种)阳性结果,说明患者血清中含有多种自身抗体,ENA系列抗体有相应的疾病抗体谱。
?670?表1 各类自身免疫病患者和健康人ENA多肽抗体检测结果 ENA多肽抗体 SLE(n=45)
34201264004000 MCTD(n=20) 1801621000007 SS(n=10) 70074000000 PSS(n=6) 30011300000 PM/DM(n=19)
8004206020RA(n=40) 100053000070 对照组(n=40)
00000000000
抗ENA谱抗Sm抗U1RNP抗SSA抗SSB抗Scl270抗JO21抗rRNP抗DM253抗RA254抗D′E
表2 各类自身免疫病抗SLE
SS
自身抗体
抗Sm+抗U1RNP+抗SSA抗Sm+抗SSB抗SSA+抗SSB抗Sm抗U1RNP抗rRNP 4221484 阳性例数
52191
自身抗体抗SSA+抗SSB 抗SSA 阳性例数
43
抗U1RNP+抗D′E抗U1RNP+抗SSA抗D′E+抗SSB抗U1RNP抗D′E 表2 各类自身免疫病抗ENA单项或多项阳性自身抗体分布(续)
PSS PM/DM
RA
自身抗体
抗Scl270+抗SSA+抗SSB抗Scl270 阳性例数
12
自身抗体抗JO21+抗SSA抗JO21+抗SSA+抗SSB 抗JO21+抗SSB 抗JO21抗DM253 阳性例数
31112 自身抗体
抗RA254+抗SSA+抗SSB
抗RA254+抗SSA抗SSA+抗SSB 抗RA254抗SSA 阳性例数
11251
3.Sm抗体被认为是SLE的标志抗体,且与病程无关,对
早期、不典型的SLE或经治疗后回顾性诊断有较大的帮助,但有报道[2]曾根据膜上3个区带(28×103、29×103、13.5×103)同时出现与否来判断阳性或阴性,这样检出率偏低。刘华平等报道只要3个区带出现任何一条即可判为阳性,这样大大提高了SLE的检出率。
4.多数学者建议,对一个测定结果的解释要从两方面考虑:一是抗体效价,二是抗体的型别[3]。在抗ENA检测中出现单项SSA抗体、SSB抗体、U1RNP抗体阳性,其临床意义广泛,SSA抗体、SSB抗体阳性可见于SS、SLE、MCTD、PM/DM、RA、PSS等患者;U1RNP抗体阳性可见于MCTD、SLE、PSS、RA、SS等患者,因此应结合其他自身抗体和临床加以综合分析,得出正确诊断。
5.本组6种自身免疫性疾病,因发病原因至今未明,临床表现变化多端,不易被早期诊断。而免疫印迹法检测ENA自
身抗体操作简便、省时、特异性好、用血量少、无需特殊设备、重复性好(经多次反复冻融的标本检测结果完全一致),可同时完成对10种自身抗体的识别和过筛,对提高自身免疫性疾病的诊断水平有很大的帮助。 参 考 文 献 123
刘敏,冯柏庄,俞纯山.系统性红斑狼疮患者自身抗体检测方法的
应用与评价.陕西医学检验,1997,12(1):324.林宝顺,徐元斌,陈之航,等.ANA、
抗ds2DNA、抗ENA谱联合检测在诊断SLE病人中的应用.陕西医学检验,1999,14(4):627.
许玲玲,刘敏,俞纯山.系统性红斑狼疮患者4种抗体检测的临床意义.江西医学检验,1999,17(2):98299. (收稿日期:2006203204)
免疫印迹法检测在自身免疫性疾病 ENA 多肽抗体谱及 临床意义.
