microRNA-146b在病毒性心肌炎患者血清中的表达及其
临床意义
刘佩勇 谢梅 纪玉强 赵朝 程曼丽
【摘 要】摘要 目的：检测病毒性心肌炎(viral myocarditis)患者血清中microRNA-146b(miR-146b)的表达水平，并初步探讨其临床意义。方法： 选择40例病毒性心肌炎患者和40例健康体检者，采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)检测研究对象血清中miR-146b的水平。采用电化学发光法检测病毒性心肌炎患者血清中肌钙蛋白T(cardiac troponin T，cTnT)的水平，并分析miR-146b与cTnT水平的关系。结果：病毒性心肌炎患者血清中miR-146b水平(1.85±0.68)明显高于健康体检者(1.35±0.42)，二者差异有统计学意义(t=3.957，P<0.01)。病毒性心肌炎患者血清中miR-146b水平与cTnT水平呈明显正相关(r=0.635，P<0.05)。结论：病毒性心肌炎患者血清中miR-146b水平升高，且与心肌损伤程度相关，提示miR-146b可能参与病毒性心肌炎的病理学发病过程。 【期刊名称】中国临床医学 【年(卷),期】2015(000)004 【总页数】3
【关键词】关键词 心肌炎； 病毒性； microRNA； 肌钙蛋白T ·论著·
病毒性心肌炎(viral myocarditis)是一种由病毒感染引起的心肌局限性或弥漫性心肌疾病。目前，病毒性心肌炎的临床诊断主要依靠病毒感染史、临床表现以及心电图、心肌损伤标志物等。另外，心内膜心肌组织活体检查有助于确诊。
目前临床上对病毒性心肌炎尚无特异性的治疗方法，病毒性心肌炎经对症治疗后，多数患者预后良好，极少数患者会死于严重心律失常、心力衰竭或心源性休克[1-2]。microRNA(miRNA)是一类长度为18～25 bp的非编码RNA，与靶mRNA的3’UTR完全或不完全互补结合，能调控靶基因的作用。miRNA在细胞增殖、分化及凋亡过程中发挥重要作用，参与机体的正常生理及病理过程[3-4]。microRNA-146b(miR-146b)是miR-146家族中的一员，主要调节炎性反应，在人体固有免疫过程中发挥重要作用[5-6]。国内外学者研究发现，miR-146b在病毒性心肌炎动物模型及患者的心肌组织中呈高表达[7-10]。为了进一步探讨miR-146b在病毒性心肌炎的发生与发展中的作用，本研究采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)方法检测了40例病毒性心肌炎患者和40例健康体检者血清中miR-146b的水平，并分析miR-146b与肌钙蛋白T(cardiac troponin T，cTnT)水平的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2014年3月—2015年5月在我院住院治疗的急性病毒性心肌炎患者40例，其中男性19例，女性21例，年龄18～45岁，平均年龄(29.14±8.96)岁；所有病例的病理诊断均依据2001年版成人急性病毒性心肌炎诊断参考标准[11]。收集同期在我院进行体检的40例健康者作为对照，其中男性20例，女性20例，年龄17～46岁，平均年龄(30.18±10.26)岁。两组研究对象的性别和年龄差异均无统计学意义(P>0.05)。本研究的内容，研究对象知情同意，并获得了本院伦理委员会的批准。
1.2 样本采集 入组的病毒性心肌炎患者均在治疗前空腹静脉采集5.0 mL血
液，健康对照者空腹静脉采集5.0 mL血液。将血液标本在室温下2500 r/min离心10 min后，吸取上层血清至无RNA酶的EP管中，4 ℃条件下12 000 r/min再次离心10 min，然后收集上清液至新的无RNA酶的EP管中，-80 ℃保存备用。
1.3 RT-PCR法检测血清miR-146b水平 两组各取800 μL标本血清，用mirVanaTMmiRNA分离试剂盒(购自美国Ambion公司)提取血清总RNA，然后用紫外分光光度仪测定RNA液在260 nm和280 nm波长处的吸光度(A值)，并计算RNA的浓度和纯度。将A260/A280值为1.8～2.1的RNA液用于反转录反应。应用TaqMan MicroRNA Reverse Transcription试剂盒(购自美国ABI公司)将提取的RNA反转录成cDNA，实验操作严格按照试剂盒说明书进行。应用TaqMan?Gene Expression Assay试剂盒(购自美国ABI公司)对miR-146b及内参18S RNA进行定量PCR扩增。扩增反应条件为：95 ℃预变性15 min，94 ℃ 15 s、58 ℃ 30 s、70 ℃ 30 s，共35个循环。每个样本设立3个复孔。扩增结束后自动获得循环阈值即Ct值，目的基因的相对表达水平采用2-△△Ct法进行分析；ΔΔCt=实验组ΔCt-对照组ΔCt；ΔCt=目的基因Ct-内参基因Ct。
1.4 电化学发光法检测血清cTnT水平 取100 μL病毒性心肌炎患者的标本血清，采用电化学发光法检测血清中cTnT水平，操作严格按照试剂说明书进行。
1.5 统计学处理 采用SPSS 16.0软件对实验数据进行统计学处理。计量资料采用±s表示，两组比较采用t检验；计数资料比较采用χ2检验。血清中miR-146b与cTnT水平的关系采用Pearson相关法分析。以P<0.05为差异有统计
microRNA-146b 在病毒性心肌炎患者血清中的表达及其临床意义
