不同组织器官中华蛇根草绿原酸含量的比较研究
石金敏1，徐梦菲2，周 灿1，邹青伟1，张晓燕1*
【摘 要】〔摘要〕目的比较中华蛇根草不同组织器官中绿原酸的含量。方法选用Inertsil C(18)色谱柱，以甲醇-0.02％磷酸溶液（20∶80）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为325 nm，柱温40℃。结果绿原酸在0.027～1.700 μg(r=0.999 9)范围内线性关系良好。2月花期采收的中华蛇根草茎、叶、花中绿原酸的含量分别为3.39、0.77、22.79 mg/g。结论中华蛇根草不同组织器官绿原酸含量差异较大，其中花含量最高。该方法能准确、快速地进行定性定量检测，可用于中华蛇根草中绿原酸含量的测定。 【期刊名称】湖南中医药大学学报 【年(卷),期】2016(036)004 【总页数】3
【关键词】〔关键词〕中华蛇根草；绿原酸；高效液相色谱法
中华蛇根草Ophiorrhiza Chinensis LO为茜草科蛇根草属的植物，是中国特有的物种，主产于四川、贵州、湖北、湖南、江西、安徽、福建、广东、广西等地。花冠裂片背面有翅，无角状附属体或附属体很小；萌果较小，宽不超过10毫米,花冠裂片背面有阔翅,叶基部两侧对称或近对称，干后常变淡红。蛇根草属植物约200余种，广泛分布于亚洲的热带、亚热带，我国已知68种，该属植物主要含有甾醇、喜树碱、蒽醌衍生物、胡萝卜苷和木犀草素等活性成分[1]。湖北武当山地区地处亚热带和温带的分水岭，气候温和，中华蛇根草资源非常丰富。为了考察其药效与活性成分的关联性，试验发现其富含绿原酸[2]。因此，本文建立了HPLC测定中华蛇根草中绿原酸含量，并对不同部位的绿原酸含量
进行了比较，对其进行方法学验证，为有效控制药材质量及合理利用植物资源提供参考。
1材料与仪器
1.1 材料
中华蛇根草样品2月采于湖北十堰市牛头山森林公园，经湖北医药学院附属人民医院药学部张晓燕主任药师鉴定为茜草科蛇根草属植物中华蛇根草Ophiorrhiza chinensis LO。绿原酸标准品（质量分数≥98％，批号:110753-200413）购自中国食品药品检定研究院。乙腈、甲醇为色谱纯；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。 1.2 仪器
日本岛津LC-20AT高效液相色谱仪（岛津有限公司）；KQ-500DV超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；FA2004万分之一电子分析天平（上海天平仪器厂）；KWY-101型电热干燥箱（武汉市武昌实验仪器厂）。
2方法与结果
2.1 样品的采集
2014年2月于牛头山森林公园老虎寨，海拔582.10米处采集花期全草。采集当天分别洗净，置于50℃恒温箱中干燥36 h，按全草、茎、叶、花不同部位分类，分别粉碎，过四号筛，备用。 2.2 色谱条件[3]
色谱柱：Inertsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相（甲醇-0.02％磷酸水溶液，20∶80）；流速1.00 mL/min；检测波长325 nm；柱温为40℃，理论塔板数按绿原酸峰计算均不低于3 000。色谱图见图1。
2.3供试品溶液的制备
取样品粉末约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 mL，称定质量，超声处理30 min（超声功率500W），放冷至室温，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，过滤，取续滤液，即得。 2.4对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含42.5 μg的溶液，即得绿原酸对照品溶液。 2.5线性关系考察
分别取适量的绿原酸对照品，精密称定，加甲醇溶解并添加至刻度，摇匀，以甲醇逐级稀释，分别得到质量浓度为170.00、85.00、42.50、21.25、10.63、5.31、2.66 μg/mL绿原酸对照品溶液，进样10 μL。以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程为： 绿原酸的进样量在0.027～1.700 μg之间呈线性关系。 2.6 精密度试验
取中华蛇根草全草，同“2.3”项下方法，制备供试品溶液，精密吸取10 μL，连续进样6次，同法测定，计算RSD 0.35％，表明仪器精密度良好。 2.7 稳定性试验
取中华蛇根草全草，同“2.3”项下方法制备供试品溶液，同“2.2”项法测定，分别于制备后0、2、4、8、12、24 h进样10 μL，测定峰面积，计算RSD 0.47％，表明绿原酸在24 h内基本稳定。 2.8 重复性试验
取中华蛇根草全草6份，制备供试品溶液，测定，结果显示绿原酸峰面积的
不同组织器官中华蛇根草绿原酸含量的比较研究
