岛津LC-20AT高效液相色谱操作步骤
1、流动相的处理
? 共有5个流动相储液瓶。一般RP-HPLC中，A（无机相）、B（有机相）为分析流动相；C（水）、D（甲醇）用于柱子后处理清洗；50%甲醇-水用于清洗自动进样针 ? 流动相体积VA、B=100+总流速×比例系数×分析时间（mL）；Vc≥300mL； VD≈350mL；V50%甲醇≈300mL ? 所有流动相须用0.22um孔径滤膜过滤（根据有机相和无机相选用相应滤膜），清洗储液瓶，不能在清洗过程中留下污迹，并超声30min，超声完成后禁止剧烈摇晃
2、开机
? 开启插座电源 电脑开机 ? 打开仪器电源（LC—20AT最后打开，等待数秒后“control”指示灯亮） ? 打开软件（Labsolution 仪器 LC—20A），若连接正常则软件显示 LC就绪
3、自动排气
? 将各流动相过滤头缓慢放入流动相中 ? 在简单设置界面设置总流速为0.2mL/min；在自动排气界面设置自动排气参数（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ各流动相≥5min，自动进样器≥25min），不勾选“排气结束后运行控制器” ? “下载” “执行自动排气” ? 等待排气结束
4、样品处理
? 稀释后的样品（浓度约1mg/mL，不宜过高）用注射器经0.22um过滤器注
入样品瓶
? 样品应≥2/3样品瓶体积（1.5mL样品瓶）
? 按序号依次将样品瓶放入自动进样器的样品架上 ? 切记：将样品架推到底！
5、系统平衡及设置分析条件
? 自动排气完成后，设置柱温、检测波长等参数 (建议柱温高于环境10℃)，用梯度洗脱初始流动相平衡柱子（流动相比例与梯度洗脱初始比例一致） ? “下载” “激活/取消激活仪器”，此时系统显示：等待柱温稳定 ? 缓慢增加总流速至样品分析所需流速，Vmax=1ml/min（每隔1分钟增大0.2mL/min，注意每次增大都点击“下载”） ? 在时间程序界面设置梯度洗脱条件
? 若要保存方法文件：文件 方法文件另存 ? 等待基线平稳（留意泵压力是否稳定），待系统显示：LC就绪，右击，进行基线测试斜率（一般＜3000即可） ? 开始测样
6.“单次分析开始”或“批处理”
6.1单次分析开始 ? 依次输入样品名（样品ID可有可无）、样品瓶、瓶架（1）、进样体积等 ? 注意数据文件所在文件夹，输入数据文件名 打开 ? 确定 6.2批处理 ? “向导” ? “新建”， 样品组号（1），选择“未知样品”，依次输入文件名及其他 ? 注意批处理文件所在文件夹，勾选“数据文件名自动递增”、 不勾选“自动创建文件名” ? 完成 ? 选中全部序列 ? 开始批处理
7.柱子后处理：先用易溶解样品的流动相清洗（一般用高比例有机相洗15min），10%甲醇洗30min，再用90%甲醇洗30min；长期不使用保存于纯甲醇中
方法一： ? 在简单设置界面设置：流动相C-90%；流动相D-10% 下载 ? 切换柱温箱off ? 30min后设置：流动相C-10%；流动相D-90% 下载 方法二（推荐）： ? 设置洗柱程序 ? “下载” ? “单次分析开始” 样品瓶输入“-1”文件名“洗柱” ? 系统提示“禁用采集” 确定
8.数据处理（打开Labsolution 再解析）
8.1标准曲线 ? 数据处理 打开文件 “向导” ? 勾选特征峰、外标法 ? 依次输入最大级别数（标曲的点数）、单位、化合物名、浓度等 完成 ? 应用到方法 方法另存为 ? 主项目 批处理 打开批处理文件 ? 填写表格：首行（标准、初始化标准点），（标准样数与前面的最大级别数相对应，剩下的为未知）、（文件方法为先前保存的方法，向下填充）、（标准样品级别号分别1.2.3.4.5未知样品0）
? 批处理再解析开始 批处理文件另存 ? 主项目 校准曲线（可找到已做成的标曲） 8.2生成报告 ? 打开要生成报告的数据文件 ? 视图 手动积分栏，处理数据文件 ? 生成报告 ? 右击“属性”进行调整，预览、打印
8.3检测限、定量限的确定、扣除背景（略）
9.实验结束后，“切换泵ON/OFF ”确认泵泵压力降为零
关软件 再关仪器
10.电脑关机 关闭插座电源。
? 注意事项
? LC—20A（G）液相教学视频要在英文目录下才可以播放，不能含中文字
? 在流速较大时，若发现泵压力接近19MPa尚有上升趋势，必须马上降低流速
岛津LC-20AT制备液相色谱使用方法
