专题二 课题1 微生物的实验室培养 使用班级
姓名 小组
【复习目标】
1.了解培养基、消毒、灭菌等基础知识； 2.理解无菌技术的操作。
【自主预习】 一、培养基
1．概念：人们按照微生物对__营养物质 _的不同需求，配制出的供其_生长繁殖__的营养基质。
2.种类：按照培养基的物理性质划分
（1）_液体__培养基：配制成的__液体___状态的基质。 （2）__固体__培养基：在__液体___培养基中加入___凝固剂__，如琼脂后，配制成的____固体___状态的基质，是实验室中最常用的培养基之一，微生物在其上面生长，可形成肉眼可见 的___菌落___。 | 3.组成成分：各种培养基的具体配方 不同__，但一般都有__水___、__碳源___、_氮源__、_无机盐___，此外培养基还需要满足微生物生长对___PH___、_特殊营养物质__ 以及__氧气___的需求。 二、无菌技术
获得纯净培养物的关键是___防止外来杂菌的入侵__。
1．消毒是指使用较为温和_____的物理方法或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分__ __对人体有害___的微生物（不包括__芽孢__和__孢子____）。实验室常用的消毒方法有____煮沸消毒法___、__巴氏消毒法___、____化学药剂消毒法____。
2.灭菌是指使用____强烈_____的理化因素杀死___物体内外所有____的微生物，包括__芽孢___和___孢子__。常用的灭菌方法有____灼烧灭菌___、__干热灭菌__、___高压蒸汽灭菌____。
3.实验操作中避免杂菌的污染，主要包括四方面的内容：
（1）对实验操作的__空间____、操作者的___衣着和手_____进行清洁和消毒。
（2）将用于微生物培养的__器皿__、___接种用具____和___培养基____等进行灭菌。 （3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在____酒精灯火焰____附近进行。 （4）实验操作时应避免___已经灭菌处理____的材料用具与周围物品相接触。 %
4.在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被_____微生物污染____。使用后的培养基丢弃前一定要进行___灭菌__处理，以免污染环境。 三、分离纯化大肠杆菌
本实验使用的培养基为___牛肉膏蛋白胨___培养基。进行大肠杆菌的纯化培养，可分
为 _制备培养基___和___纯化大肠杆菌___两个阶段。
1.制备培养基的一般步骤为：__计算___、__称量___、__溶化__、__灭菌_、_倒平板__。 2.纯化大肠杆菌：微生物接种最常用的方法是__平板划线法___和____稀释涂布法____。 （1）平板划线法通过___接种环___在琼脂固体培养基表面连续___划线__的操作，将___聚集__的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
（2）稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的___梯度稀释___，然后将不同稀释度的菌液___分布涂布__到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
3.菌落的概念：__由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体___。 4.结果分析：
（1）如果接种了大肠杆菌的培养基上生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，说明____接种符合要求____； —
（2）若培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中___有杂菌未消化__； （3）未接种大肠杆菌的空白对照的培养基在培养过程中若长出菌落，则说明_培养基灭菌___不彻底，实验失败。 四、菌种保存
1.对于频繁使用的菌种，可以采用___临时保藏__的方法。
（1）过程：首先将菌种接种到试管的___固体斜面培养基上__，合适温度下培养，菌落长成后，放于____4℃__冰箱中保藏，每隔3—6个月，都要将菌种从旧的培养基上转移到新的培养基上。
（2）缺点：保存时间___短___，菌种容易被___污染___或产生__变异____。
2.对于需要长期保存的菌种，可以采用___甘油管藏___的方法，将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混匀于__-20℃___的冷藏箱内保存。 【知识拓展】
1．消毒与灭菌的区别
消毒是一种采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌，而对被消毒的物体基本无害的措施。例如一些常用的对皮肤、水果、饮用水进行药剂消毒的方法；对啤酒、牛奶、果汁和酱油等进行消毒处理的巴氏消毒法，等等。 <
灭菌是采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。例如各种高温灭菌措施等。 2．微生物的营养类型
异养微生物生命活动所需要的能源，主要靠有机物氧化分解释放能量，碳源是异养微生物的主要能源物质，碳源对异养微生物来说，不仅可为机体提供构成细胞物质，而且为机体提供完成整个生理活动所需能量。某些异养微生物也可以光能作为能源，例如红螺菌，在环境中没有有机物的条件下，它可以利用光能，把环境中的CO2合成为自身有机物；在有有机物存在的条件下，可以利用有机物进行生长，其代谢类型为兼性营养型细菌。
自养微生物和异养微生物类型的划分，主要依靠能否以CO2作为生长的主要或唯一碳源，而不是决定于氮源。例如异养微生物最常用的氮源是无机氮源中的铵盐和硝酸盐。
3.生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。 4.培养基的配制原则：
①目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。 ②营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比4∶1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3∶1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。 ③pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。
【当堂练习】
1．用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时( )
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①可以用相同的培养基 ②都需要使用接种针进行接种 ③都需要在火焰旁进行接种 ④都可以用来计数活菌 A．①② B．③④ C．①③ D．②④ 2．下列有关微生物培养与应用的说法正确的是( )
A．天然培养基是指直接取自自然界不需加工的培养基
B．接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理 C．大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段 D．分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源 3．下列对灭菌和消毒的理解不正确的是( )
A．灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B．消毒和灭菌实质上是完全相同的 C．接种环用灼烧法灭菌
D．常用灭菌方法有灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法 4．用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是( )
A．未接种的选择培养基 B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基 C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D．接种了的选择培养基 5．下列关于微生物的分离和培养的有关叙述，错误的是 ( )
2.1微生物的实验室培养导学案
