关于《消毒技术规范》使用中消毒液染菌量测定法检出率
的研究
蔡微微 冯维良
【期刊名称】浙江医学 【年(卷),期】2013(000)007 【总页数】2 ●检测诊断
随着细菌耐药性的不断增强，医院感染管理形势越来越严峻，1999年某地就曾出现过因为戊二醛消毒液配制错误而引起龟分枝杆菌暴发性流行的案例[1]，因而消毒液染菌量测定成为医院控制院内感染的重要措施。国家卫生部制定的《消毒技术规范》2012版要求使用中的灭菌消毒液必须无细菌生长，其染菌量测定方法为：1ml的被检消毒液和9ml的中和试剂混合后，从按一定比例稀释的中和后混合液中取lml进行倾注培养，48h后菌落计数[2]。但是当中和后混合液中细菌量很少时，受接种量只有1ml的限制，易出现漏检，这也可能成为发生医院感染（尤其是免疫力低下的患者）的一大潜在危险因素。针对这种可能性，笔者设计了相应实验，对5类消毒剂加入（10±2）CFU/ml的细菌，然后按照《消毒技术规范》2012版消毒液染菌量测定法检测，现将结果报道如下。
1 材料和方法
1.1 材料 大肠埃希菌ATCC25922，由中国菌种保藏管理中心提供；Densichek比浊仪，由法国生物梅里埃有限公司生产；营养琼脂，由杭州天和微生物试剂有限公司生产；消毒剂对应中和试剂，5类常用消毒剂：含有效氯消毒液、0.1%～0.5%碘消毒剂、2%戊二醛溶液、75%乙醇溶液、0.1%～0.5%季铵盐
类消毒液。 1.2 方法
1.2.1 菌液配置 取标准菌株接种于血平板培养18～24h，配成0.5麦氏单位（相当于108CFU/ml）的菌悬液，经系列梯度稀释得到（1 000±200）CFU/ml的菌悬液10ml。
1.2.2 样品制备 取1ml被检消毒液加入到9ml含有相应中和试剂的稀释液试管中，每种消毒液制备100管；每管中加入（1 000±200）CFU/ml的菌悬液10μl，充分混匀，制得含菌量接近1CFU/ml的中和混合液，中和试剂的浓度和种类参照《临床检验管理与技术规程》[2]。
1.2.3 倾注培养 从每管上述10ml的混合液中取1ml倾注培养，每种消毒液100次，5种消毒液共500次，48h后菌落计数，分别记录每种消毒液有细菌生长的次数，得出细菌的检出率。同时从被检消毒液和含相应中和试剂的10ml混合液中取1ml倾注培养作为阴性对照，5类消毒液共做5个平板；将浓度为（1 000± 200）CFU/ml的菌悬液用无菌0.9%氯化钠溶液稀释10倍后取1ml倾注培养作为阳性对照，共做3个平板。1.3 统计学处理 使用SPSS13.0统计软件，对5类消毒液的细菌检出率采用χ2检验进行分析。
2 结果
阴性对照无细菌生长，阳性对照细菌生长良好；中和后混合液实际加入细菌浓度=500个平板上总细菌个数/500=0.98CFU/ml。当消毒液细菌量为10CFU/ml时，细菌平均检出率为62.4%，5类消毒液之间细菌检出率的差异无统计学意义（χ2=1.926，P=0.749），说明用该方法检测消毒液染菌量与消毒液种类无关，具体数据见表1。
3 讨论
评估消毒剂灭菌效果时，监测消毒灭菌的过程优于自消毒灭菌后的物品中分离微生物，其原因在于自消毒灭菌物品分离一个或几个微生物是困难的[3]。消毒剂的消毒效果评价主要还是在于微生物的分离，因此，使用中消毒液染菌量的测定就显得尤为重要。现有关于消毒剂消毒效果监测的文献主要集中于消毒剂的合格率方面，而对于消毒技术规范中染菌量测定方法自身方面的研究很少。本研究结果显示，消毒剂染菌量设计在10CFU/ml时，使用规范中的方法出现了漏检情况，与邓通洋等[4]通过泊松分布的公式推导出使用中消毒剂染菌量测定法在95%检出率时的检出限是30CFU/ml相吻合，并用公式P（0）=e-λ（其中λ=0.98）计算，63.0%的理论检出率与本研究62.4%的检出率无统计学差异（P＞0.05），进一步为上述理论提供了实验依据。
《消毒技术规范》2012版规定，使用中灭菌消毒液必须无菌生长。根据本研究结果，当消毒液中细菌量很少时，用该方法检测灭菌消毒剂的染菌量将出现漏检，且与消毒剂的种类无关；当使用中消毒液染菌量规定≤100CFU/ml时，规范中的检测方法能符合要求。目前医院实际使用的灭菌剂是戊二醛消毒液，在使用过程中除了监测戊二醛的浓度外，还要监测其微生物浓度，但监测过程相对复杂、监测频率较高导致检测成本也比较高，所以在条件允许的情况下，很多医院对于医疗器械的消毒灭菌还是首选物理方法，不主张化学方法。基于戊二醛使用中消毒液消毒效果检测相对困难，建议尽量减少采用戊二醛消毒液作为灭菌消毒液来对医疗器械进行灭菌，或者对《消毒技术规范》的使用中灭菌消毒液染菌量检测方法进行改进。 4 参考文献：
关于《消毒技术规范》使用中消毒液染菌量测定法检出率的研究
