免疫组化实验步骤及配
方
文件编码(GHTU-UITID-GGBKT-POIU-WUUI-8968)
免疫组化步骤
1. 多聚甲醛灌流取材,多聚甲醛后固定,30%多聚糖溶液沉糖; 2. 冰冻切片(1d-14d脊髓>=20μm;14d-28d>=10μm;DRGd=10μm) 3. 0.01MPBS洗10min×3次; 4. 1NHCL暴露抗原30min;
5. 去离子水洗,0.01MPBST洗10min×3次;
6. 3%双氧水(0.01MPBS配制)洗10min,灭活内源性HRP; 7. 0.01MPBST洗10min×3次;
8. 5%-10%血清封闭30min(0.01MPBST配制); 9. 一抗过夜,一抗用PBST稀释;
10. 0.01MPBS洗10min×3次,二抗3孵育小时; 11. 0.01MPBS洗10min×3次,HRP-亲和素3小时; 12. 0.01MPBS洗10min×3次,DAB显色12-18min。
免疫组化常用试剂配制
1. 0.1MPB:14.5gNa2HPO4·12H2O
500mLH2O 1.5gNaH2PO4·2H2O
2. 0.1MPBS:500mL0.1MPB 45gNaCl
3. 0.01MPBST:100mL0.01MPBS 10滴TritonX-100 4.INHCL:盐酸:水=1:10 5.4%多聚甲醛:13.6gKH2PO4 3.6gNaOH 40g多聚甲醛
1000mLH2O
注:1).需要60°C加热溶解,过滤使用;
2).多聚甲醛每次比需要多称10g,以弥补后面过滤的损失;
3).现将多聚甲醛溶于1000mL水中,然后一边加热搅拌一边缓慢加入多聚甲醛的助溶剂
NaOH,待NaOH和多聚甲醛都完全溶解后再加入KH2PO4,溶后过滤备用。
6.DAB液:以0..1MPB配制,DAB浓度0.05%,H2O2浓度0.03%。 注:1).H2O2临用时再加; 2).用DAB染后用0.01MPB洗。 7.30%蔗糖:150g蔗糖 500mL4%多聚甲醛 注:可同时沉糖后固定。
8.封闭液:10%山羊血清(做免疫荧光时另加0.1%BSA)。
免疫组化实验步骤及配方
![](/skin/haowen/images/icon_star.png)
![](/skin/haowen/images/icon_star.png)
![](/skin/haowen/images/icon_star.png)
![](/skin/haowen/images/icon_star.png)