免疫组化实验步骤及配
方
文件编码（GHTU-UITID-GGBKT-POIU-WUUI-8968）
免疫组化步骤
1. 多聚甲醛灌流取材，多聚甲醛后固定，30%多聚糖溶液沉糖; 2. 冰冻切片（1d-14d脊髓>=20μm;14d-28d>=10μm;DRGd=10μm） 3. 0.01MPBS洗10min×3次; 4. 1NHCL暴露抗原30min；
5. 去离子水洗，0.01MPBST洗10min×3次；
6. 3%双氧水(0.01MPBS配制)洗10min，灭活内源性HRP； 7. 0.01MPBST洗10min×3次；
8. 5%-10%血清封闭30min（0.01MPBST配制）； 9. 一抗过夜，一抗用PBST稀释；
10. 0.01MPBS洗10min×3次，二抗3孵育小时； 11. 0.01MPBS洗10min×3次，HRP-亲和素3小时； 12. 0.01MPBS洗10min×3次，DAB显色12-18min。
免疫组化常用试剂配制
1. 0.1MPB:14.5gNa2HPO4·12H2O
500mLH2O 1.5gNaH2PO4·2H2O
2. 0.1MPBS:500mL0.1MPB 45gNaCl
3. 0.01MPBST:100mL0.01MPBS 10滴TritonX-100 4.INHCL:盐酸：水=1：10 5.4%多聚甲醛：13.6gKH2PO4 3.6gNaOH 40g多聚甲醛
1000mLH2O
注：1).需要60°C加热溶解，过滤使用；
2).多聚甲醛每次比需要多称10g，以弥补后面过滤的损失；
3).现将多聚甲醛溶于1000mL水中，然后一边加热搅拌一边缓慢加入多聚甲醛的助溶剂
NaOH，待NaOH和多聚甲醛都完全溶解后再加入KH2PO4，溶后过滤备用。
6.DAB液：以0..1MPB配制，DAB浓度0.05%，H2O2浓度0.03%。 注：1).H2O2临用时再加； 2).用DAB染后用0.01MPB洗。 7.30%蔗糖：150g蔗糖 500mL4%多聚甲醛 注：可同时沉糖后固定。
8.封闭液：10%山羊血清（做免疫荧光时另加0.1%BSA）。
免疫组化实验步骤及配方
