醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告
前言 血清蛋白:
血清蛋白是血液中脂肪酸的载体当身体需要能量或建筑材料时,脂肪细胞将脂肪酸释放到血液中,脂肪酸被血清蛋白捕获并运送到所需的位置
牛血清白蛋白的相对分子质量是10的四次方,这是不确定的,但是是一种聚合物,并且在一些地方测量到70,000,这是一个数据。它将用于聚合酶链反应
牛血清蛋白是血液的主要成分,分子量为68kD。等电点4.8氮含量16%,糖含量0.08%只含有己糖和己糖胺,脂肪含量仅为0.2%白蛋白由581个氨基酸残基组成,其中35个半胱氨酸残基形成17个二硫键,在肽链的第34位有一个游离巯基白蛋白可以与各种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合血液中的白蛋白主要起维持渗透压、缓冲液、载体和营养的作用。在动物细胞的无血清培养中,白蛋白的加入可以起到生理和机械的保护作用和载体作用。
醋酸纤维素薄膜电泳:
醋酸纤维素薄膜电泳以醋酸纤维素薄膜为载体它是纤维素的乙酸酯,由纤维素的羟基乙酰化而成。它溶解在有机溶液如丙酮中,并可被涂覆成厚度为0.1毫米-0.15毫米的均匀微孔膜太稠,吸水性差,分离效果差;如果它太薄,如果它缺乏应有的机械强度,膜就会变脆。
醋酸纤维素薄膜电泳操作简单、快速、廉价。它已广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖白蛋白、甲胎蛋白、类固醇 激素和同工酶等的分离和分析。虽然其分辨率低于聚丙烯酰胺凝胶电泳,但具有简单、快速的优点。功能:
1。(1)醋酸纤维素膜对蛋白质样品的吸附很少,没有“拖尾”现象。染色后,背景可以完全脱色,各种蛋白染色带可以清晰分离,提高了测定的准确性。
(2)快速节省时间醋酸纤维素膜的亲水性比滤纸差,膜中含有的缓冲溶液少,电渗少,电泳时大部分电流由样品传导,分离速度快,电泳时间短。一般来说,电泳时间只有45-60分钟。染色和脱色后,整个电泳过程只需约90分钟。
(3)灵敏度高,样品消耗少。血清蛋白仅需要2μl血清,即使样品体积小至0.1μl,对于仅含5μg蛋白的样品也可获得清晰的分离带。临床医学检查用它来检测病理条件下微量异常蛋白的变化。(4)应用广泛有些蛋白质不容易用纸电泳分离,如胎儿α球蛋白、溶菌酶、胰岛素、组蛋白等。醋酸纤维素膜电泳可以更好地分离。(5)电泳染色后,醋酸纤维素膜可浸泡在冰醋酸、乙醇混合溶液或其他溶液中,形成透明的干板,有利于扫描定量和长期保存。2.与聚丙烯酰胺凝胶电泳相比,醋酸纤维素薄膜电泳操作简单,但分离效果不是很好。例如,在醋酸纤维素薄膜电泳中,只有5-6条带能与白蛋白分离,而在聚丙烯酰胺凝胶电泳中,只有10条带能与白蛋白分离。 1。实验目的
1。掌握电泳分离血清蛋白的原理;
2。掌握血清蛋白醋酸纤维素膜电泳的操作方法二。实验原理 1。电泳是指带电粒子在电场中以相反的电荷移动到电极上的现象 在一定的酸碱度条件下,由于等电点不同,不同的蛋白质具有不同的电荷和不同的性质,因此它们在一定电场中的移动方向和移动速度是不同的,即它们的电泳迁移率是不同的。因此,它们可以分开。影响电泳迁移率的因素:
内在因素:蛋白质携带的净电荷量,蛋白质的大小和形状外在因素:电场强度,溶液的ph值,溶液的离子强度和电渗现象。血清中各种蛋白质的等电点在ph 4.0至7.3之间,在pH8.6的缓冲溶液中带负电,在电场中向正极游动血清中各种蛋白质的等电点不同,所以电荷的数量也不同。此外,各种蛋白质的分子大小不同,因此在同一电场中的游动速度也不同。那些带有小分子和多种电荷的粒子运动得更快。相反,它更慢。
4。醋酸纤维素溶于有机溶剂(如丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)。)然后涂布成均匀的膜,成为醋酸纤维素膜该膜具有均匀的泡沫状结构,厚度约为120微米,渗透性强,分子运动阻力小。薄膜电泳具有痕量、快速、简便、分辨率高、无拖尾和样品上
吸附现象等优点。它已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、血红蛋白、酶、免疫电泳等的分离。
5。醋酸纤维素薄膜电泳可根据电泳速度将血白蛋白分为5个区带。从阳性端开始,依次为白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ