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抗凝血酶测定

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抗凝血酶(AT)测定

1. 实验原理

在待测血浆中加入过量的凝血酶,凝血酶与血浆中的AT形成1:1的复合物,剩余的凝血酶作用于显色肽S2765,裂解出显色基团对硝基苯胺(pNA),用405nm测吸光度,显色程度与剩余凝血酶的量成正相关,而与血浆AT的量呈负相关。 2. 标本采集

2.1 早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。 2.2 3.8%(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。 3. 标本存放:全血贮存在4~10oC不超过2小时,最好1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,此血浆在室温22~24oC下可存放2小时,在2~4oC可存放4小时,在-20oC可存放2周,长时间保存需在冰冻条件下,在-70oC可存放6个月。

冷冻血浆融化时,应将盛血浆的容器置37oC水浴中,并轻轻摇动,使其迅速融化,以免凝血因子消耗,解冻后立即测试。冷冻过的标本不能再次冷冻,否则结果不准确。 4. 标本运输:低温条件下运输。

5. 标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作该项目检测。 6. 实验材料:

6.1每个试剂均购自德国Dade Behring Marburg公司。 1)AT测定试剂盒(代号P/N:20008900) 冻干发色底物S2765

2瓶(6mg/瓶)

冻干活化X因子试剂(包括牛活化X因子、肝素、缓冲液、牛血清白蛋白) 2瓶

2)定标血浆 Calibration Plasma(代号P/N:8467300) 3)正常质控血浆 Normal control plasma(代号P/N:8467011) 4)异常水平发色底物法质控血浆

Abnormal chromogenic

control plasma level I/II(代号P/N:8467600) 5)Cleaning agent(代号P/N:9832700) 6)Cleaning solution(代号P/N:9831700) 6.2试剂准备

发色底物:用2mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶冻干发色底物,盖上盖子,轻摇至完全溶解,置15~25oC30分钟,用前摇匀,勿用力振摇。

活化X因子试剂:用2.5mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶冻干活化X因子试剂,盖上盖子,轻摇至完全溶解,置15~25oC30分钟,用前摇匀,勿用力振摇。 6.3试剂保存

未开封的试剂可保存在2~8 oC至试剂盒上标明的有效期。 试剂溶解后,于原瓶中15 oC ,7天内有效;2~8 oC,3月内有效;-20 oC,6月内有效。

建议试剂不使用时,最好将其倒回原瓶中,保存于2~8 oC,不要将试剂冷冻。 7. 仪器设备:

7.1 仪器名称:syxmex CA7000全自动血凝仪 7.2 仪器厂家:日本希森美康公司 7.3 仪器型号:CA7000 7.4 仪器技术参数:

7.4.1 试剂位:18个,具冷藏功能。

7.4.2 样本位:40个,可通过换盘连续添加。 7.5 仪器校准程序:

7.5.1 校准频率:当方法改变,试剂厂家或试剂型号改变,仪器维修影响测定结果等情况时,必须进行校准。 7.5.2 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)。 8. 操作步骤:

8.1 开机:CA7000的开关在仪器的右侧。开机后仪器自检,当屏幕上边显示Ready时可进行试检

8.2洗针:在主屏幕上选Rinse Probe键,然后按Execute进行洗针

8.3 检查消耗品:

1.准备反应杯:打开仪器上盖装反应杯的盖子查看反应杯是否够量,不足时,需及时添加。

抗凝血酶测定

抗凝血酶(AT)测定1.实验原理在待测血浆中加入过量的凝血酶,凝血酶与血浆中的AT形成1:1的复合物,剩余的凝血酶作用于显色肽S2765,裂解出显色基团对硝基苯胺(pNA),用405nm测吸光度,显色程度与剩余凝血酶的量成正相关,而与血浆AT的量呈负相关。2.标本采集2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。2
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