版本号/修订状态： 一/第0次修改 猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品 中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 页码/总页数： 5/8 实 施 日 期： 2024.01.01 者合并4000r/min离心5min，吸取上清液倒掉。向5个离心管中分别加入适量四种硝基呋喃代谢物混合标准溶液，使四种硝基呋喃代谢物最终测定浓度分别为0.5ng/ml、1.0ng/ml、2.0ng/ml、4.0ng/ml、10.0ng/ml。再向每个离心管中加入适量混合内标准溶液，使用四种硝基呋喃代谢物内标物最终测定浓度均为2.0ng/ml。 7.1.2 水解和衍生(注意避光)
向棕色离心管中加入20mL 0.2mol/L的盐酸溶液，涡旋1min使之混合均匀，之后加入0.3mL浓度为0.05mol/L的2-硝基苯甲醛，混匀，于37℃恒温振荡水浴中避光衍生16小时。 7.1.3 净化处理
将衍生后的样品冷却至室温，加入5ml 0.1mol/l的磷酸氢二钾，并用1 mol/l的氢氧化钠溶液调PH约为7.4，混合均匀。之后用8000r/min离心10min,以小于2ml/min的流速过PEP-2小柱（规格为60mg/3ml，用5ml甲醇、5ml水活化），并用10ml的水洗涤固相萃取小柱，然后负压抽干柱子15min。用5ml乙酸乙酯洗脱于20ml棕色瓶中，并在40℃下氮气吹干。 用样品定容溶液（10ml乙腈，0.3ml的乙酸用水稀释至100ml）定容至1ml，充分溶解，并用0.2um滤膜过滤。
7.1.4 样品溶液的制备
称取待测样品2g(精确到0.01g)，置于50ml棕色具塞离心管中，加入10ml甲醇-水混合溶液（2+1），均质1min，再用5ml甲醇-水混合溶液洗涤均质器刀头，二者合并4000r/min离心5min，吸取上 清液倒掉。向离心管中分别加入适量四种硝基呋喃代谢物混合标准溶液，使用四种硝基呋喃代谢物内标物最终测定浓度均为2.0ng/ml。
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作业指导书 猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品 中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 7.1.5 阴性样品基质空白溶液的制备
文 件 编 号： XZJY089-00-2024 版本号/修订状态： 一/第0次修改 页码/总页数： 6/8 实 施 日 期： 2024.01.01 称取阴性样品2g ,置于50ml棕色离心管中，加入10ml甲醇-水混合溶液（2+1），均质1min,再用5ml甲醇-水混合溶液洗涤均质器刀头，二者合并4000r/min离心5min，吸取上清液倒掉。 7.2 高效液相色谱测定 7.2.1 色谱条件
色谱柱：Atlantis-C18,3.5um,150mm×2.1mm(内径）或相当者 柱 温：35℃ 进样量：40ul
离子源：电喷雾(ESI)，正离子模式 扫描方式：多反应监测（MRM） 电喷电压：5000V 7.2.2 标准曲线的制作
用流动相将试样标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.8、2、20、40、80μg/mL的标准工作液,浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。基质匹配样品HPLC色谱图参见附录A中的图A.1。 7.2.3 定量测定
待测样液中硝基呋喃类代谢物的响应值应在标准曲线线性范围 内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。 7.2.4 平行试验
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。
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文 件 编 号： XZJY089-00-2024 版本号/修订状态： 一/第0次修改 猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品 中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 7.2.5 回收率试验
页码/总页数： 7/8 实 施 日 期： 2024.01.01 吸取适量混合标准工作溶液和内标标准工作溶液，衍生、浓缩，得到相应浓度的混合标准衍生溶液和内标标准衍生溶液。用基质空白溶液稀释成所需浓度的标准校准溶液。阴性样品中添加标准溶液按照7.1.4的操作进行，测定后计算样品添加的回收率。 八、分析结果的计算及检出限
8.1试样中硝基呋喃代谢物的含量由色谱数据处理软件或按式(1)计算获得计算:
1000 X=C× 1000VM× ........................................... (1)
式中：
X---试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（ug/kg） C---从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/ml）
V---样品溶液最终定容体积，单位为毫升（ml） m---样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g） 8.2精密度
本部分的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。 8.3 重复性
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文 件 编 号： XZJY089-00-2024 版本号/修订状态： 一/第0次修改 猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品 中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 页码/总页数： 8/8 实 施 日 期： 2024.01.01 再重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r。
如出现差值超过重复性限，应舍弃实验结果并重新完成两次单个实验的测定。 8.4再现性
在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R。
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