作 业 指 导 书
OPERATING INSTRUCTIONS
猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品
中硝基呋喃类代谢物残留量的测定
编号：XZJY089-00-2024 版本：第一版 第0次修改
编制： 审核： 批准：
实施日期：2024.01.01
作业指导书 猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品 中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 一、编制目的
文 件 编 号： XZJY089-00-2024 版本号/修订状态： 一/第0次修改 页码/总页数： 1/8 实 施 日 期： 2024.01.01 为规范猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的检验方法，编制本指导书。 二、适用范围
本指导书适用于猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定。 三、编制依据
GB/T20752-2006《食品安全国家标准 食品中猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量测定》 四、实验原理
试样残留的硝基呋喃类代谢物在酸性条件下用2-硝基苯甲醛衍生化，用Oasis HLB 或性能相当的固相萃取柱净化。液相色谱-串联质谱电喷雾离子化检测,用同位素标记的内标法定量。 五、试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为 GB/T6682规定的一级水。 5.1试剂 5.1.1甲醇。 5.1.2 乙腈。 5.1.3 乙酸乙酯。 5.1.4 硫酸氢二钾。 5.1.5 乙酸。
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作业指导书 猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品 中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 5.1.6 二甲亚砜。 5.1.7 磷酸氢二钾。
5.1.8 2-硝基甲醛（2-BBA）。 5.1.9 氢氧化钠。 5.2试剂配制
文 件 编 号： XZJY089-00-2024 版本号/修订状态： 一/第0次修改 页码/总页数： 2/8 实 施 日 期： 2024.01.01 5.2.1 稀盐酸：0.2 mol/L，量取17 ml浓盐酸用水定容至1000 ml。 5.2.2 氢氧化钠溶液：1 mol/L，称取40 g氢氧化钠，用水溶解，定容至1000 ml；0.2 mol/L，取100ml 1 mol/L氢氧化钠溶液，用水稀释至500 ml。
5.2.3 甲醇－水溶液（1+1，体积比）：取50 ml甲醇和50 ml水混合。 5.3标准品
5.3.1四种硝基呋喃代谢物标准物质：
呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-噁唑烷基酮
（3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone，缩写为AMOZ）、呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-噁唑烷基酮 （3-amino-2-oxazolidinone，缩写为AOZ）、
呋喃西林代谢物氨基脲（semicarbazide，缩写为SEM）、
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作业指导书 猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品 中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 文 件 编 号： XZJY089-00-2024 版本号/修订状态： 一/第0次修改 页码/总页数： 3/8 实 施 日 期： 2024.01.01 呋喃妥因代谢物1-氨基-2-内酰脲（1-aminohydantoin，缩写为AHD），四种标准物质纯度均≥ 99%。
5.3.2 四种硝基呋喃代谢物内标物：D5-AMOZ、D4-AOZ、13C15N-SEM、13C3-AHD，四种内标标准物质纯度均≥ 99%。
5.3.3 四种硝基呋喃代谢物衍生产物标准物质：2-NP-AMOZ、2-NP-AOZ、2-NP-SEM、2-NP-AHD，四种硝基呋喃代谢物衍生产物标准物质纯度均≥ 99%。
5.3.4 四种硝基呋喃代谢物衍生产物内标标准物质：2-NP-D5-AMOZ、2-NP-D4-AOZ、2-NP-13C15N-SEM、2-NP-13C3-AHD，四种硝基呋喃代谢物衍生产物内标标准物质纯度均≥ 99%。
5.3.5 衍生剂：含0.1 mol/L 2-硝基苯甲醛（2-Nitrobenzaldehyde，缩写为2-NBA）的乙腈溶液；称取0.151 g 2-硝基苯甲醛溶于10 ml乙腈，现用现配。
5.3.6 流动相A：含浓度为5mmol/L乙酸铵的0.01%甲酸水溶液：精确量取甲酸1 ml加水稀释至1000 ml，再加入0.385 g乙酸铵制成。 5.3.7 四种硝基呋喃代谢物标准储备液：0.1ug/ml。称取适量四种硝基呋喃代谢物标准物质，分别甲醇稀释成1.0mg/ml的标准储备液。避光保存于-18℃冰柜中，可使用六个月。
5.3.8 四中硝基呋喃代谢物内标准溶液：0.1ug/ml。移取适量的四
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作业指导书 猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品 中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 文 件 编 号： XZJY089-00-2024 版本号/修订状态： 一/第0次修改 页码/总页数： 4/8 实 施 日 期： 2024.01.01 种硝基呋喃代谢物标准储备液，用甲醇稀释成0.1ug/ml的混合内标准溶液，避光保存于-18℃冰柜中，可使用三个月。 六、仪器和设备
6.1 高效液相色谱（HPLC）仪：超高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。
6.2 高速冷冻离心机（10 000 r/min） 6.3 pH计 6.4 恒温振荡水浴
6.5 电子天平 感量0.01 g和0.0001 g 6.6 氮气吹干仪 6.7 旋涡混合器
6.8 真空泵：真空度达到80KPa 6.9 微量注射器：25ul,100ul 6.10 棕色具塞离心管：25ml,50ml 6.11 贮液器：50ml 6.12 组织捣碎机 七、分析步骤 7.1 样品的制备 7.1.1 样品处理
用组织捣碎机将试样粉碎，分出0.5kg作为试样。称取5个阴性样品2g ,分别置于50ml棕色离心管中，加入10ml甲醇-水混合溶液 （2+1），均质1min,再用5ml甲醇-水混合溶液洗涤均质器刀头，两
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新版猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定作业指导书
