草鱼养殖池噬菌蛭弧菌的分离与鉴定

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草鱼养殖池噬菌蛭弧菌的分离与鉴定

作者：陈煜安

来源：《教育》2024年第04期

摘要：利用双层平板法，以嗜水气胞菌（Aeromonas hydrophila）为宿主菌，从草鱼养殖池水中分离蛭弧菌一株；根据蛭弧菌hit基因序列设计引物进行PCR扩增，所得产物经胶回收、测序比对，发现其序列与噬菌蛭弧菌的hit基因100%同源，表明本研究所分离得到的为噬菌蛭弧菌（Bdellovibrio bacteriovorus）。

关键词：蛭弧菌；噬菌蛭弧菌；分离；鉴定；PCR

噬菌蛭弧菌（Bdellovibrio bacteriovorus），是一类由Stolp和Petzold于1962年首次发现的、原核生物界唯一一类周质型专性捕食性细菌。其体形小，在土壤、淡海水、污水等不同环境中分布广泛，且运动活泼，具有“寄生”和“裂解（溶菌）”宿主菌的生物学特性。 养殖概论

近年来，随着集约化水产养殖业的进一步发展，以及养殖水体的污染，嗜水气单胞菌等革兰氏阴性病原菌对草鱼等水产养殖动物造成了严重的危害。蛭弧菌能寄生和裂解大多数种类的革兰阴性菌。鉴于这一特性，噬菌蛭弧菌受到了国内外学者的广泛关注，逐渐成为水产养殖业中一种良好的微生态制剂，在农业、工业和医学等不同领域均显示出了广阔的应用前景。 本研究利用双层平板法从草鱼养殖池水中分离得到蛭弧菌一株，根据噬菌斑形成等对其进行初步的鉴定，同时根据蛭弧菌的host interaction（hit）基因序列设计了特异性引物，从分子水平上对该菌株进行了鉴定，确定该菌为噬菌蛭弧菌。为该菌应用于水产养殖疾病防治等理论研究与实践应用提供了基础资料。 材料与方法

水样 采自绍兴皋埠镇某草鱼养殖池，用采水器从底部取水，装于50mL灭菌的离心管中。 宿主菌株 以本实验室分离自患病草鱼并保存的嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）为宿主菌。

培养基 ①双层培养基：上层为0.6%自来水琼脂，用于蛭弧菌筛选、分离和纯化；下层为1.5%自来水琼脂；②普通营养肉汤培养基（NB）；③浸出液：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠15g，蒸馏水加至1000mL，pH7.0。

主要试剂 Taq酶、dNTPs购自上海生工产品；DNA回收试剂盒购自爱思进；pGMT载体、大肠杆菌感受态等均购自天根公司；其他为国产分析纯。