技术协作信息技术探讨与推广并对4种酶液的酶活性及其对甲胺磷的从小麦粉、鲫鱼肌肉、蚕蛹头部和蚕蛹整体中提取和纯化乙酰胆碱酯酶，为0.4396U/mgpro；敏感性进行比较，结果表明：来源于鲫鱼肌肉的乙酰胆碱酯酶粗酶液的比活力最高，来源于蚕蛹头部的乙酰胆碱酯酶对甲胺磷的敏感性最高，被抑制率为17.424％。综上所述，来自蚕蛹头部的乙酰胆碱酯酶可以作为常见有机磷农药快速检测的最佳酶制剂。多种来源乙酰胆碱酶活力大小的影响因素◎靳晓磊1杨广丽1张鑫琳2曲含1陆叶3王鑫瑶1农业自古以来就是国民经济的基础，为了实现我国经济腾飞及综合实力的提并在高。我国一直在探索农业发展道路，农业科技、经济和社会各个方面都取得了经济巨大成就。但现代中国农业在社会、严重制约着农业和生态等方面存在问题，的发展。我国农业发展必须确定明确的目最标，选择适合我国实情的农业发展模式，终实现中国农业现代化。胆碱酯酶(cholinesterase)是一类糖蛋白，以多种同工酶形式存在于体内。一般可分为真性胆碱酯酶和假性胆碱脂酶。真性胆碱酯酶也称乙酰胆碱酯酶(acetyl-cholinesterase)，主要存在于胆碱能神经末梢突触间隙，特别是运动神经终板突触后膜的皱摺中聚集较多;也存在于胆碱能神经元内和红细胞中。此酶对于生理浓度的Ach作用最强，特异性也较高。一个酶分子可水解3×10分子Ach，一般常简称为胆碱酯酶。假性胆碱酯酶广泛存在于神经胶肾、肠中。对Ach的特异质细胞、血浆、肝、性较低，假性胆碱酯酶可水解其他胆碱酯类，如琥珀胆碱。胆碱酯酶蛋白分子表面的活性中心有两个能与乙酰胆碱结合的部位，即带负电荷的阴离子部位和酯解部位。酯解部位含有一个由丝氨酸的羟基构成的酸性作用点和一个由组氨酸咪唑环两者通过氢键结合，增构成的碱性作用点，强了丝氨酸羟基的亲核活性，使之易于与乙酰胆碱结合。胆碱酯酶水解乙酰胆碱的过程可分为三个步骤：①乙酰胆碱分子结构中带正以静电引力与胆碱电荷的季铵阳离子头，酯酶的阴离子部位相结合;同时乙酰胆碱分子中的羰基碳与胆碱酯酶酯解部位的形成乙丝氨酸的羟基以共价键形式结合，酰胆碱和胆碱酯酶的复合物。②乙酰胆碱与胆碱酯酶复合物裂解成胆碱和乙酰化胆碱酯酶。③乙酰化胆碱酯酶迅速水解，分离出乙酸，酶的活性恢复。一、材料与方法酶活性的测定如表1所示：3.乙酰胆碱酯酶对甲胺磷敏感性的比较。不同来源的乙酰胆碱酯酶对甲胺磷敏感性的比较结果如图3所示：在干净试管中加入50μl酶液（对照管不加酶液）和2900μl（对照管加2950μl）pH=8.0的磷酸盐缓冲溶液，置于37℃水浴中预热3min，然后加入50μl底物AtchI溶液反应5min，加入1000μlSDS溶液终止反应，最后加入50μl显色剂立即在412nm处DTNB显色，对照管调零，测定吸光度，记录数值。平行测定3次。图3不同来源的酶对甲胺磷的敏感二、结果与分析性比较1.不同来源的提取液中蛋白质含量比三、结论较。本实验通过对不同来源的胆碱酯酶对不同来源的提取液中蛋白质含量（AChE）的比酶活力大小及其对甲胺磷农的测定结果如图1所示：药的敏感性进行了研究。由于实验条件的限制，本实验从不同来源的原料中提取乙酰胆碱酯酶，没有采用过凝胶柱纯化处理，因此提取所得到酶液的为AChE的粗酶液。动物性AChE的酶活力一般高于植物性AChE，但前者AChE粗酶液容易受到外界环境的破坏，提取过程中对提取溶液要保存时间较短。求更高，同时，不易于保存，图1不同来源的酶液中蛋白质含量比较AChE的粗酶液中蛋白质含量与AChE比但仍存在一定的活力不具有线性相关性，2.不同来源的乙酰胆碱酯酶的比活力联系。动物性AChE的酶活性和灵敏性均比较。高于植物性AChE，因此一般选用来源于对不同来源的乙酰胆碱酯酶的比活动物的AChE作为酶制剂。鲫鱼肌肉中提力测定，结果如图2所示：取的AChE的粗酶液的比活力比蚕蛹中提取的高，但由于蚕蛹头部来源的AChE对因此选择来源于蚕甲胺磷的敏感性最高，蛹头部的AChE作为最佳农药残留的检测用酶。AChE主要存在于蚕蛹头部的神经组织中，存在于蚕蛹身体内的AChE含量很低。图2不同来源的酶比活力比较（作者单位：1.黑龙江大学；2.湖南农业大学工学院；3.湖州师范学院求真学院）窑窑
多种来源乙酰胆碱酶活力大小的影响因素
