第六章 体外放射分析技术
【学习目标】
了解体外分析技术的发展和现状。掌握放射免疫分析的基本原理、基本方法及质量控制。掌握免疫放射分析的基本原理及与放射免疫分析法的主要区别。了解非放射免疫分析技术的几种类型，特别是时间分辨荧光免疫分析技术的基本原理及特点。
【内容要点】
一、体外分析的发展和现状
核医学体外分析技术主要是利用放射分析方法或其派生的相关技术在体外进行机体内物质种类和含量的检测。主要用来测定患者血清或体液中的激素、生物活性物质和药物浓度等。它最早是在60年代由Yalow和Berson等偶然观察到
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I标记的胰岛素与胰岛素抗体的结合与体系中存在的非标记胰岛素的量呈一定
的相关性。从而建立了放射免疫分析法。放射免疫分析具有其它方法所不能比拟的特点：①灵敏度高；②操作简便，成本低。
免疫放射分析属于放射性非竞争结合分析，是在放射免疫分析理论的基础上，随着单克隆抗体技术的进步，不断发展而来。非放射性标记的免疫分析从上世纪80年代以来得到快速发展。如荧光酶免疫分析、化学发光酶免疫分析以及时间分辩荧光免疫分析等方法。 二、放射免疫分析 （一）基本原理
放射免疫分析的基本原理是利用放射性标记的抗原和非标记抗原同时与限量的特异性抗体进行竞争性免疫结合反应。这种竞争结合反应可用下式表示：
*
Ag+Ab *Ag-Ab+*Ag
+
Ag
Ag-Ab+Ag
*
Ag：标记抗原； Ag：非标记抗原； Ab：特异性抗体；
Ag-Ab：抗原-抗体复合物； *Ag-Ab：标记抗原-抗体复合物
*
Ag -Ab的量（因变量）与Ag的量（自变量）之间存在的竞争性抑制数量关
系是放射免疫分析的定量基础，这种数量关系可以由标准竞争抑制曲线（简称标准曲线）来表示。 （二）基本试剂
放射免疫分析的反应中主要包括三种试剂；抗体、标记抗原、非标记标准抗原（标准品）。除此之外，现在许多试剂盒还提供分离试剂或材料，缓冲液及质量控制用品等。
1、抗体 放射免疫测定，需要选择亲和力大、特异性强、滴度高的使用。 2、标记抗原 要求用于标记抗原的放射性核素比活度要高，放射化学纯度要好，还要有很好的免疫活性。主要有125I、14C和3H。
3、标准品 对标准品要求：①应与被测物属同一物质，其化学结构和免疫活性相同；②放射化学纯度高，影响分析的杂质少；③定量精确。
4、分离方法 分离的目的是放射免疫反应达到平衡后，使抗原抗体复合物和游离抗原分离，两者分离后才能分别测量其放射性，理想的分离技术应具备既安全又迅速，不受其它因素干扰，操作简便，重复性好等优点。分离方法主要有：双抗体法、沉淀法、双抗体法+沉淀法、吸附分离法、固相分离法等。
5、放射性测量仪器 如用
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I做标记，常用γ井型计数器对γ射线进行测
量。如用3H或14C做标记用液体闪烁计数器对β射线进行测量。 （三）质量控制（quality control,QC）
放射免疫分析的质量控制包括：实验室内部质量控制和实验室间质量控制。
1、实验室内部质量控制 主要指标：零标准管结合率、非特异性结合率、最低浓度管和最高浓度管的结合率之差应大于30%、标准曲线连线回归的参数、ED25、ED50、ED75和质控图。
2、试剂盒质量控制 主要指标：精密度、灵敏度、准确度、特异性、稳定性、健全性。
3、实验室外质量控制 三、免疫放射分析
免疫放射分析是放射免疫分析的变种，是非竞争性的反应。可用下式表示：
Ag+*Ab Ag?*Ab+*Ab
Ag:待测抗原 *Ab：标记抗体
原理是以125I标记抗体，用过量的标记抗体与待测抗原（或标准品）结合。形成标记抗体-抗原复合物和剩余的标记抗体。待反应平衡后，分离出多余的游离抗体，测上清液中的放射性，将待测抗原的结合率与标准抗原的标准曲线进行比较，即得所测样品的含量。目前常用实验方法有抗体夹心法、标记第三抗体法、双标记抗体法。免疫放射分析具有反应速度快、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点。但目前还主要限于蛋白质和多肽抗原，很多小分子半抗原和短肽还不能应用。
四、非放射免疫分析
1、酶标记免疫分析 典型的酶标记免疫分析是酶联免疫吸附法。 2、化学发光免疫分析技术 主要有：化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析技术、电化学发光免疫测定。
3、时间分辩荧光免疫分析 TRFIA是一种特殊的荧光分析法，其原理是用具有长荧光寿命的物质作为荧光标记物（常用的是稀土元素，即镧系元素）标记抗原或抗体，通过测定荧光量，定性或定量分析抗原或抗体。该方法具有特异性强、稳定性好、适用范围宽、样品用量少、自动化高、且速度快等优点。但仪器主要靠进口，试剂品种少。 【习题】 一、名词解释
1．放射免疫分析法 2．免疫放射分析法 3．放射受体分析法 4．受体放射分析法 5．(RIA的)NSB 6．RIA中的B0 7．抗体的亲和力 8．抗体的特异性 9．抗体的滴度
核医学习题集6章-体外放射分析技术
