实验一 蛋白质的两性电离和等电点的测定
【目的】
验证蛋白质的两性电离与等电点性质。 【原理】
蛋白质由氨基酸组成。蛋白质分子除两端游离的氨基和羧基可解离外，其侧链上的某些酸性基团或碱性基团，在一定的溶液pH条件下，都可解离成带负电荷或带正电荷的基团。因此，蛋白质具有两性解离性质。当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成阳离子和阴离子的趋势相等，既净电荷为零，成为兼性离子，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点（isoelectric point,pI）。蛋白质在等电点状态时溶解度最低，容易沉淀析出。蛋白质在大于其等电点的pH值溶液中带负电荷；在小于其等电点的pH值溶液中则带正电荷。蛋白质在等点电以外的pH值溶液中，因分子带有同种电荷而相互排斥，不易沉淀。本实验通过观察酪蛋白在不同pH溶液中的溶解度来测定其等电点。
PrNH3+COOH（pH＜pI）OH-H+PrNH3+COO-（pH=pI）OH-H+PrNH2COO-（pH＞pI）
蛋白质解离成阳离子 蛋白质成兼性离子 蛋白质解离成阴离子
【操作】
1. 蛋白质的两性电离
取试管1支，按以下步骤加入各种试剂，观察现象变化并记录。
步骤 (1) 5g/L酪蛋白醋酸钠溶液1ml，加入0.1g/L溴甲酚绿指示剂6～7滴，混匀后，观察并记录溶液的颜色。 (2)用细滴管缓慢滴加L HCl溶液，边滴边摇，直至产生明显的大量沉淀，观察并记录沉淀与溶液 现象 颜色的变化。 (3)继续滴入L HCl溶液，观察并记录沉淀与溶液颜色的变化。 (4)再滴入L NaOH溶液进行中和，边滴边摇，使之再度产生明显的大量沉淀，继续滴加L NaOH溶液，沉淀又溶解，观察并记录溶液颜色变化。
2. 酪蛋白等电点的测定
取试管5支，编号后按下表的顺序准确地加入各种试剂并混匀。静置室温20分钟后观察各管沉淀出现情况，并以－，＋，＋＋，＋＋＋，＋＋＋＋ 符号记录沉淀的多少。
试管号 加入物（ml） 蒸馏水 L醋酸溶液 mol/L醋酸溶液 mol/L醋酸溶液 5g/L酪蛋白醋酸钠溶液 溶液的最终pH 1 － － 2 － － － 静置室温20分钟 现象 3 － － 4 － － 5 － － 【结果及分析】
【思考题】
1．为什么说蛋白质是两性电离电解质，何谓蛋白质的等电点 2. 在等电点状态下，为什么蛋白质容易发生沉淀
3. 本实验中酪蛋白处于等电点时则从溶液中沉淀析出，由此得出蛋白质在等电点时必然沉淀，此结论对吗，为什么
实验一 蛋白质的两性电离和等电点的测定
