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植物组织培养基的配制与植物愈伤组织诱导
一、 实验目的；
通过植物组织培养基和植物愈伤组织诱导实验的学习和训练，使学生了解植物组织培养的基本原理和操作技术，初步掌握MS固体培养基制备方法、外植体的常规灭菌技术以及愈伤组织诱导方法。 二、 实验原理：
根据植物细胞全能性原理，培养植物材料。即在无菌条件下，将植物的器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）放在人工培养基上进行培养，通过细胞分裂，形成一团薄壁细胞，即愈伤组织。愈伤组织可以在适宜的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下进行再分化，重新产生出植物的各种器官和组织，进而发育成完整的植株。 三、实验容 实验包括以下3部分容： 实验1-1、植物组织培养基母液的配制和保存 实验1-2、MS培养基的配制与灭菌 实验1-3、胡萝卜愈伤组织的诱导
实验1-1 植物组织培养基母液的配制和保存
1、目的要求 学习植物组织培养基母液的配制方法，为培养基的配制做准备。 2、基本原理
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植物培养基是植物离体培养的组织或细胞赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供近似活体生存的营养环境，主要包括水、大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖、凝固剂和植物生长调节等物质。 在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将培养基成分首先配制成比实际培养基浓度大若干倍的母液，然后在配制培养基时，再根据所需浓度，按比例稀释。本实验以MS培养基为例，学习培养基母液的配制。
MS培养基母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长激素母液，在不同类型的培养基中使用。 3、实验仪器设备和试剂 3.1仪器、用具
分析天平、酸度计（或pH试纸）、冰箱、药匙、玻棒、称量纸、滴管、洗瓶、记号笔、烧杯（50ml、100ml、200ml）、容量瓶（100ml、500ml、1000ml）、磨口试剂瓶（100mL、200mL、500ml、1000ml）、量杯、量筒、移液抢、微波炉等。 3.2试剂
（1）95%乙醇、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。 （2）MS培养基成分：
①大量元素(母液Ⅰ)：NH4NO3、KNO3、CaCl2.2H2O、MgSO4.7H2O、
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KH2PO4；
②微量元素(母液Ⅱ)：KI、H3BO3、MnSO4.4H2O、ZnSO4.7H2O、Na2MoO4.2H2O、 CuSO4.5H2O、CoCl2.6H2O； ③铁盐(母液Ⅲ)：FeSO4.7H2O、Na2.EDTA.2H2O；
④有机成分(母液,维生素和氨基酸)：肌醇、盐酸吡哆醇(维生素B6)、烟酸(Vpp)、盐酸硫胺素(维生素B1)、甘氨酸；
（3）植物生长调节物质：2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。 4、操作步骤
（1） MS大量元素母液的配制
按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大10倍，按照表1中的次序分别准确称量后，分别用50ml 烧杯，加入蒸馏水30 ml溶解（可以加热至60℃～70℃，促其溶解）。溶解后，按顺序倒入一大烧杯中（烧杯中事先加入约50ml的蒸馏水，目的避免由于盐浓度过高使钙离子与磷酸根离子、硫酸根离子形成不溶于水的沉淀），注意最后加入氯化钙溶液，混匀，用250mL容量瓶定容。将配制好的母液倒入试剂瓶中，贴好标签，注明母液名称、配制日期、配制人，置于4℃冰箱中保存备用。
表1 MS培养基大量元素母液（10倍）的配制剂量
化合物名称 培养基用量（mg/L扩大称取量母液体积倍数 (mg) (mL) 1L培养基吸取母液量（mL） 母液 . .word资料. ..
植物愈伤组织诱导培养实验指导
