病理科免疫组化在临床上得应用及其意义
免疫组化技术就是以免疫学得抗原抗体反应为其理论基础发展起来得一门方法学,在生物学领域尤其就是在医学得基础与临床研究中发挥重要得作用,对疾病尤其就是肿瘤得诊断、鉴别诊断及发病机制得研究提供了强有力得手段。免疫组化技术就是20世纪70年代初Sterb Berger在酶标法得基础上发明得,80年代在外国开始应用于临床研究与诊断,90年代初在我国逐渐开始应用于疑难病例得诊断与鉴别诊断。随着新技术得不断发展,抗体种类从研发开始得十几种发展到目前数百种抗体应用于临床科研得各个领域,我国在临床病理诊断上可用抗体293种。由于抗体较昂贵,所以各院根据活检量与病种不同选择不同得抗体,这些抗体对大部分疑难病例得诊断起到重要得辅助作用。对病人得预后及指导治疗具有重要得意义。 一、目前常用得抗体分四大类
1.上皮性标记物:CK high(AE3), CK low ,CK-pan,CK19,CK7, CK20,EMA,CEA,-CA15-3,SCLC , E－Caldeherin, CA125, Tg(甲状腺球蛋白) ,TTF-1
AFP。这些抗体阳性,表明肿瘤组织起源于上皮组织,如果就是恶性肿瘤,就就是癌
2.间叶组织标记物:SMA ,Desmin,Vimentin, Lysozyme, AACT , CD68 MyoD1,CD117, 这些抗体阳性,表明肿瘤组织起源于间叶组织,如果就是恶性肿瘤,就就是肉瘤。
3.神经及神经内分泌标记物:CgA ,Synaptophysin,NSE,S-100:NF (神经纤维丝蛋白),GFAP,CD99,CD56。 4淋巴细胞标志物:
T cell标记物: CD3, CD45RO , CD43, CD5, CD8,CD4,ALK,GranmB , CD56 。
B cell标记物:CD-20 ,CD79a ,CD23, CD10 , Kappa ,Lambda CD21 CD38 ,CyclinD1 ,Bcl-2。 其它:LCA,CD15,CD30,MPO ,CD34,TdT,这些抗体用于淋巴瘤33个亚型得诊断与鉴别诊断。
二、 目前开展得系列检查与意义
1、乳腺癌五项(ER、PR、C-erbB-2(Her-2)、Ki-67、P53)
ER、PR阳性,90％得病人对三苯氧胺类药物疗效好。 C-erbB-2阳性(2+－3+)可服用抗Her-2基因药物。如果ER与PR均阴性,C－erbB－2强阳性预示预后不好。
Ki-67就是细胞生长指数,代表细胞周期中除G0期以外得细胞生长速度。Ki-67值越高表明肿瘤细胞生长越快,预后越不好。P53就是广谱致癌基因,在许多肿瘤中都有表达,表达值越高预后越不好。据报道,国际上目前有抗P53基因阳性得药物用于治疗肿瘤。 2、垂体腺瘤功能六项检查
LH( 促黄体生成素),FSH(卵泡刺激素),ACTH(促肾上腺皮质激素 ),TSH( 促甲状腺素),PRL(泌乳素 )GH(生长激素 ) 。根据某一种抗体阳性表达进行术后药物治疗。 3、恶性肿瘤得Ki-67与P53常规检查
目前得研究表明,大部肿瘤得复发、转移取决于Ki-67值与P53值,而与肿瘤得组织得分型关系不就是十分密切,如中分化腺癌,如果Ki-67与P53值超过50％,预后不佳,相反,如肿瘤得组织分型为低分化腺癌,而Ki-67与P53值较低,预后也会较中分化或高分化癌得预后稍好。 4、GIST(胃肠道间质瘤)与EGIST(胃肠道外间质瘤)得诊断
GIST就是90年代新发现得肿瘤,过去均诊断为平滑肌瘤或平滑肌肉瘤,现在经过一组免疫组化可将其诊断,GIST得生物学形为一般无良性,因为小于2cm得GIST偶而也有转移。其良恶性程度取决于肿瘤得大小与核分裂像,国际确定GIST侵袭行为危险性得推荐方案如下: 危险程度 大小 核分裂数 很低 <2cm <5/50HPF 低 2-5cm <5/50HPF
中等 <5cm5-10cm 6-10/50HPF<5/50HPF 高 >5cm>10cm不计 >5/50HPF不计>10/50HPF
GIST得免疫组化结果为:CD117(+)、CD34(±)、S-100(±)Actin(±)、Desmin(-)。CD117阳性可用格林卫治疗,且效果较好。 5、淋巴瘤得WHO分型
淋巴瘤WHO最新分型有33个亚型,每个亚型得预后与治疗方案均有所不同,而淋巴瘤得诊断与分型又就是极其困难得,就是病理中得难中之难,“没有一个病理学家不在淋巴瘤上犯错误”这就是我国一位病理名家说得话,美国得淋巴瘤误诊率为33％,所以诊断淋巴瘤得免疫组化方案必须“双份套餐式”得,即每一种组织得标记物必须用2种以上得抗体,如我们诊断B细胞淋巴瘤,必须有CD20与CD79a阳性正面证实,同时还需要用CD3阴性反面来证实,因此诊断淋巴瘤需8-10种左右得抗体,才能准确地反应出淋巴瘤各种亚型得信息。
三、免疫组化在肿瘤靶向治疗中得作用
1、目前肿瘤得靶向治疗已经引起人们得重视,许多靶向药物逐渐应用于临床治疗。第一个靶向治疗得药物就是治疗淋巴瘤得抗CD20嵌与性抗体就是Rituxan。抗肿瘤单抗偶联物Zevalin(Ibritumomab tiuxetan)用于Rituxan治疗无效或复发得低度恶性B细胞瘤。
2、抗血管内皮生长因子(VEGF)重组人源化单抗Avastin(Bevacizumab)有抗肿瘤内新生血管形成作用,最近被批准为治疗转移性结直肠癌得一线药物。
3、抗表皮生长因子受体(EGFR)嵌合性单抗Erbitux(Cetuximab)用于治疗标准化疗无效,且EGFR阳性得转移性结直肠癌。
4、抗C－kit(CD117)得药物格林卫对治疗大部分GIST有明显得疗效。
5.Herceptin就是一种人源化单抗用于治疗Her-2高表达得乳腺癌与其它实体瘤如卵巢癌、前列腺癌与非小细胞肺癌。
因为有了这些靶向药物得治疗,因此在病理上检测这些靶基因得表达对于指导临床用药非常有意义。
34BE12:角收白抗体,阳性提示良性病变。前列腺抗基底细胞特异抗体(34BE12)就是一种高分子量细胞角蛋白抗体,它标记前列腺基底细胞阳性率高,而恶性分泌上皮细胞阴性,前列腺基底细胞存在与否就是判断癌与非癌得一个重要标志,34BE12明确阳性者都应诊断良性,侵润性前列腺癌34BE12阴性。
P63:抑癌基因,阳性提示良性病变。就是一种新近认识得基底细胞标记物,与P53具有同源性,染基底细胞比34BE12更敏感,因P53在良性增生、萎缩、腺病与不典型增生中可有假阴性,而P63几乎均呈阳性,在疑难得前列腺病变中应用P63或P63加34BE12得混合试剂检测对诊断更有帮助。
P504S:一前列腺癌得新标记,即使在小得针刺活检中癌得P504S阳性率仍为95％,而良性腺体(萎缩、腺病、硬化性腺病与基底细胞增生)均阴性,与34BE12及P63染色结果正相反,三者联合应用对比明显,对前列腺良恶性病变得诊断很有帮助。
Ki－67:为细胞增值得一种标记,在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达,G0期缺如,其与许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。
PCNA:增埴细胞核抗原。
CEA:多数腺癌表达。
Rb:(retinoblastoma视网膜母细胞瘤)基因就是肿瘤抑制基因,调节细胞周期。
P53:在免疫组化中均为突变型,阳性率越高,预后约差。野生型半衰期很短。
Nm23:就是转移抑制基因,其阳性表达与肿瘤转移呈负相关。E－Ca,E钙粘附蛋白,介导细胞间粘连作用得跨膜糖蛋白,其功能丧失引起细胞之间连接得破坏,主要用于肿瘤侵袭与转移方面得研究。
PS2:(雌激素调节蛋白),其表达与ER表达有关,可作为内分泌治疗与预后判断得指标之一。
CK18:低分子量角蛋白,主要标记各种单层上皮包括腺上皮,而复层鳞状上皮常阴性,主要用于腺癌诊断。
CK19:分布于单层上皮与间皮,常用于腺癌诊断,肝细胞不表达,而胆管为阳性反应。
Heppar1:肝细胞抗原,正常肝细胞与高分化肝细胞癌阳性,低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。
CK20:用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Merkel细胞癌诊断。鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜与卵巢非黏液性肿瘤常阴性。
CK7:卵巢、肺与乳腺上皮常阳性,结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性。
Villin:绒毛蛋白,正常组织中,villin通常只表达于有刷状缘得细胞上,如胃肠道上皮细胞、胰腺与胆管上皮细胞以及肾实质得上皮细胞中(特别就是近曲小管)。Villin在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌与胆管癌组织中有很高得表达率,具有明显腺样结构得肿瘤上没有villin表达,则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源得可能性极低。
乳腺癌也经常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴别排除得一种疾病。因为在转移癌组织上观察到明显得villin免疫组化阳性染色,则这个肿瘤就极不可能为乳腺来源。其她villin免疫组化染色通常为阴性表达得肿瘤还有:如卵巢浆液性癌、尿道移行细胞癌与前列腺癌。间皮瘤也经常为villin阴性表达,因此在一些情况下Villin还可以作为鉴别间皮瘤与腺癌使用抗体得一种。
但就是也有一些非胃肠道来源得肿瘤可表达villin,如子宫内膜样腺癌、卵巢粘液性癌、肾细胞癌与小部分肺癌。也有一些专家报道Villin在部分宫颈内膜腺癌病例中表达。
肝癌得诊断:Villin免疫组化染色可以显示出毛细胆管结构,因此它也可能在表达部分肝癌得管状结构上很有用。多克隆CEA就是用于此目得得第一种试剂,而且CD10(CALLA)在表达肝癌得该结构上也非常有用。多克隆CEA、villin与CD10(CALLA)在肝癌病例上得表达,相互之间并没有任何得冲突,因此如果怀疑肝癌得可能性,建议将这三种抗体共同使用以协助疑难病例得诊断。
Villin在神经内分泌肿瘤上得应用:Villin在神经内分泌肿瘤得研究上也很有帮助。众所周知,类癌与胰腺得胰岛细胞肿瘤具有相相似得形态学特征,仅在形态学上区分这两种肿瘤几乎就是不可能
得。Villin在这种情况下特别有用,因为据文献报道在85％得胃肠道类癌病例中有villin得表达,但在胰岛细胞肿瘤上未见阳性表达报道。Villin在类癌上得表达通常为胞膜阳性。另外,有一些证据表明villin在胃与下消化道得小细胞癌上得表达率比在其她部位得小细胞癌上要高。如:肺、食道、膀胱或前列腺等。据文献报道,大约有40％得肺类癌病例villin阳性,在其她一些神经内分泌肿瘤上,如甲状腺髓样癌与少数得美克尔细胞瘤上也有villin得表达。
MRP1:多药耐药相关蛋白1,影响化疗敏感性,与预后相关。MDR多药耐药基因。
TS:胸苷合成酶,就是5－FU重要作用靶点,如果其高表达,阳性反映＋＋以上,提示肿瘤细胞对5FU耐药。
Syn:突触素神经组织标志:S－100神经组织标志,存在于神经组织,垂体、颈动脉体,肾上腺髓质、唾液腺、少数间叶组织,常用于神经鞘瘤、恶黑、脂肪肉瘤、软骨肿瘤诊断。
NSE:主要用于神经内分泌肿瘤诊断。
Chr:嗜铬素,肾上腺髓质含量很高,鉴别肾上腺髓质与皮质,用于神经内分泌肿瘤诊断。
CKH:高分子角蛋白,主要标记鳞状细胞肿瘤。
CKL:低分之角蛋白,主要标记单层上皮、腺上皮。
EMA:上皮膜抗原,糖蛋白,广泛分布各种上皮及其肿瘤。
Vim(Vimentin):波形蛋白,间叶组织标志。
P504:甲酰基辅酶A消旋酶检测诊断前列腺癌得敏感性为97％,特异性为100％。
AMACR:优点在于它就是癌症特异性,只存在于癌症组织。Rubin称,AMACR亦可用作其她癌症得诊断标志物。对各种癌症细胞进行检查后发现,结肠直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤与黑素瘤都过度表达AMACR,以结肠直肠癌与前列腺癌表达最高。
CD117:胃肠间质瘤。
CD10:作为共同急性淋巴母细胞型白血病抗原,主要表达于未成熟淋巴细胞,在Burkitt淋巴癌,慢性髓性白血病等造血系统疾病得诊断中具有应用价值。近几年来发现该抗原在造血系统外得某些肿瘤中有表达,如子宫内膜间质肉瘤、恶性黑色素瘤等。抗体在对肾细胞癌进行诊断与鉴别时有一定得参考价值。
SMA:平滑肌肌动蛋白,标记平滑肌。
CD56:为神经细胞黏附分子,主要分布于大多数神经外胚层来源细胞,常用于星型细胞瘤、神经母细胞瘤、神经内分泌肿瘤诊断,也就是NK细胞瘤得重要标志,也标记小细胞肺癌。
Des(Desmin):结蛋白,广泛分布于平滑肌、心肌、骨骼肌细胞与肌上皮细胞,高分化高表达、低分化低表达。
MSA:肌特异性肌动蛋白,广泛分布于几乎所有肌型细胞中。
CD68:存在于骨髓与各神经组织得巨噬细胞用于粒细胞白血病、各种单核细胞来源肿瘤、包括恶性纤维组织细胞瘤诊断(首选)。
CD34:表达于早期淋巴造血干细胞、祖细胞、内皮细胞、胚胎纤维母细胞与某些神经组织细胞,多用于标记血管内皮细胞,血管源性肿瘤得诊断,GIST80－90％。CD31也标记血管内皮。
NESTIN:神经干细胞中极为丰富。
Ost:成骨素,为骨化细胞分泌。
AAT:抗胰蛋白酶纤维组织细胞来源肿瘤ACT抗糜蛋白酶。
GFAP:胶质纤维酸性蛋白神经组织标志,多用于星形胶质瘤诊断。
Tg:甲状腺球蛋白,甲状腺癌TG阳性。
CT:降钙素甲状腺髓样癌阳性。
PH:甲状旁腺素甲状旁腺肿瘤阳性。
TTF－I:甲状腺转录因子－1:TTF－1表达于甲状腺腺上皮与肺得上皮细胞中。在肺肿瘤研究中发现,大多数肺得小细胞癌、原发性与转移性肺腺癌、少部分大细胞未分化肺癌、大多数非典型神经内分泌肿瘤免疫组化结果显示TTF－1阳性,而肺鳞癌及绝大多数典型类癌TTF－1阴性。在甲状腺乳头状腺癌中TTF－1亦阳性,而TTF在其它组织表达阴性。据此认为TTF－1可用来鉴别肺腺癌与鳞癌,并有助于与肺转移性腺癌得鉴别。
TTF－1:在甲状腺及其肿瘤中得表达:TTF－1主要表达在甲状腺滤泡细胞中与甲状旁腺得主细胞中,TTF－1为甲状腺分化与甲状腺球蛋白分泌调节得基础物质,可促进甲状腺过氧化物酶、碘／钠得转运,TTF－1与血清TSH得活性有关,活性得TSH－R可增强TTF－1得表达。TTF－1在良恶性甲状腺组织中表达不同,正常甲状腺与良性腺瘤表达多,甲状腺乳头状癌与滤泡癌中表达少,未分化癌中不表达,TTF－1在恶性甲状腺病变中得表达强度随年龄增加而增强,而且病变存瘤期长,复发机率高。
TTF－1:在肺癌中得表达:75％得肺非小细胞癌(NSCLCs)阳性表达,腺癌(ACs)明显高于鳞癌(SCC),90％以上得原发性小细胞肺癌(SCLC)表达阳性,TTF－1在非小细胞肺癌(NSCLCs)阳性表达强度与病人得预后成呈负相关,可作为一项独立得预后指标,肺得典型性类癌(TCS)均为阴性,表明小细胞肺癌与非小细胞肺癌可能有一个不同于TCS得共同起源得理论。
P－Gp:多药耐药基因蛋白(P－Gp)－－药泵作用－－胞膜／胞浆－－阳性率越高,对下列药物耐
病理科免疫组化在临床上的应用及其意义
