葡萄球菌及致病机理

葡萄球菌及致病机理

葡萄球菌及致病机理

葡萄球菌就是一群革兰氏阳性球菌,因常堆聚成葡萄串状,故名。多数为非致病菌,少数可导致疾病。葡萄球菌就是最常见的化脓性球菌,就是医院交叉感染的重要来源,菌体直径约0、8μm,小球形,但在液体培养基的幼期培养中,常常分散,细菌细胞单独存在。葡萄球菌的代表种有金黄色葡萄球菌(黄色)、白色葡萄球菌(白色)、柠檬色葡萄球菌(橙色)等,该细菌就是抗菌物质中毒与一般营养不良时成为次级的微生物区系的主要细菌。因乳制品与肉类的腐败而出现的中毒,认为多由此类细菌引起,原因就是葡萄球菌在增殖过程中可产生肠毒素。这种毒素的生物活性在于能刺激呕吐中枢产生催吐作用。

一、形态结构

球形或稍呈椭圆形,直径1、0um左右,排列成葡萄状。葡萄球菌无鞭毛,不能运动。无芽胞,除少数菌株外一般不形成荚膜。易被常用的碱性染料着色,革兰氏染色为阳性。其衰老、死亡或被白细胞吞噬后,以及耐药的某些菌株可被染成革兰氏阴性。

二、培养特性

营养要求不高,在普通培养基上生长良好,在含有血液与葡萄糖的培养基中生长更佳,需氧或兼性厌氧,少数专性厌氧。28~38℃均能生长,致病菌最适温度为37℃,PH为4、5~9、8,最适为7、4。在肉汤培养基中24小时后呈均匀混浊生长,在琼脂平板上形成圆形凸起,边缘整齐,表面光滑,湿润,不透明的菌落。不同种的菌标产生不同的色素,如金黄色、白色、柠檬色。色素为脂溶性。葡萄球菌在血琼脂平板上形成的菌落较大,有的菌株菌落周围形成明显的完全透明溶血环(β溶血),也有不发生溶血者。凡溶血性菌株大多具有致病性。

三、生化特性

可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖,产酸不产气。甲基红反应阳性,VP反应弱阳性。

许多菌株可分解精氨酸,水解尿素,还原硝酸盐,液化明胶。

金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力,对磺胺类药物敏感性低,但对青霉素、红霉素等高度敏感

四、金黄色葡萄球菌的致病性

金黄色葡萄球菌就是人类化脓感染中最常见的病原菌,可引起局部化脓感染,可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等,甚至败血症、脓毒症等全身感染。

葡萄球菌及致病机理

金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素与侵袭性酶:

1. 溶血毒素:外毒素,分α、β、γ、δ四种,能损伤血小板,破坏溶酶体,引起肌体局部缺血与坏死;

2. 杀白细胞素:可破坏人的白细胞与巨噬细胞;

3. 血浆凝固酶:当金黄色葡萄球菌侵入人体时,该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固,阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关;

4. 脱氧核糖核酸酶:金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温,可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌;

5. 肠毒素:金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素,分为A、B、C、D、E及F五种血清型。

注意:当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品,如牛奶与奶制品、肉、蛋等,在温度条件适宜时,经8-10小时即可相当数量的肠毒素。肠毒素可耐受100°C煮沸30分钟而不被破坏,它引起的食物中毒症状就是呕吐与腹泻。

此外,金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。

五、金黄色葡萄球菌的检验

1、样品制备:

固体或半固体食品: 以无菌操作称取25g样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均 质杯内,于8000r/min均质1～2min,制成1:10样品匀液。 液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的玻璃珠),经充分振摇制成1:10样品匀液。 供计数检验时,可按十进位递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。

2、选三个连续稀释度,从每个稀释度分别取1 mL稀释样品液,接种3管含10％氯化钠, 金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性,可在10-15%NaCl肉汤中生长。 因此,这事实上就是一种选择性的增菌。胰蛋白胨大豆肉汤。样品的最高稀释度必须达到能获得阴性终点,置36±1℃培养48 h。

3、用3 mm接种环,从有细菌生长的各管中移取1 环,划线接种于表面干燥的琼脂平板,置36±1℃培养45～48h。

4、从有细菌生长的每一平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落,移种到肉汤培养基中,置36±1℃培养20～24 h。

5、取肉汤培养物0、3mL同0、5mL凝固酶试验兔血浆于8mm×100mm试管内充分混合,置 36±1℃培养,定时观察就是否有凝块形成,至少观察6 h,以内容物完全凝固,使试管倒置或 倾斜时不流动者为阳性。试验中需同时做巳知阳性与阴性对照。对可疑结果,应进行革兰氏染色、镜检与其她辅助试验(如耐热核酸酶试验等)加以证实。

6、报告结果:根据凝固酶试验结果查最近似值(MPN)表,报告金黄色葡萄球菌 的MPN/g (mL)。

葡萄球菌及致病机理

六、金黄色葡萄球菌的快速检验(举例)

1.动物学实验法

用幼猫与白鼠作为研究对象,注射或喂食肠毒素,然后观察动物出现的异常生理变化。

2.美国3M公司生产的金黄色葡萄球菌快速检测试片,可以直接计数产生耐热核酸酶的金黄色葡萄球菌,操作简单,缩短了时间。

3.法国梅里埃公司生产的miniVIDAS利用荧光免疫的方法检测葡萄球菌肠毒素,在仪器上45分钟可以得到结果。

4.PCR技术:利用PCR扩增技术扩增DNA,然后检测金黄色葡萄球菌肠毒素的基因。

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