知识点+练习 微生物的实验室培养

微生物的实验室培养(5年15考)

(2013新课标全国Ⅱ卷、四川理综、江苏卷，北京卷、浙江、山东，天津)

一、培养基

1概念：按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质

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2．营养构成?

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1一般都含有水、、无机盐、碳源、氮源

2还需满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及O2的要求

3．培养基的种类及用途

划分 标准 培养基 的种类 液体培养基 物理性质 固体培养基 化学成分 天然培养基 合成培养基 半固体培养基 加凝固剂，如琼脂 特点 不加凝固剂 用途 工业生产 观察微生物的运动、鉴定 微生物的分离与鉴定、活菌计数、菌种保藏 成分不明确的天然物质 培养基成分明确 培养基中加入某种化学物选择培养基 质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长 工业生产 分类、鉴定 培养、分离出特定微生物(如在培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素；在培养金黄色葡萄球菌时，可在培养基中加入高浓度的食盐等) 鉴别不同种类的微生物，如可用伊红—美蓝培养基检测饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽) 用途 根据微生物的代谢特点，在鉴别培养基 培养基中加入某种指示剂或化学药品 特别提醒 自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同： ①自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无机物，而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的有机物，因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。②含氮无机物不但能给自养微生物提供氮源，也能作为能源物质，提供能量，如NH3既作为硝化细菌的氮源也作为能源。 二、无菌技术

特点：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死??

1．消毒? 物体表面或内部的部分微生物不包括芽孢和孢子

??常用方法：煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法

特点：指使用强烈的理化因素杀死物体内外??

2．灭菌? 所有微生物包括芽孢和孢子

??常用方法：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌3．消毒和灭菌比较

比较 理化因素的作用强度 消毒 灭菌 较为温和 强烈

消灭微生物的数量 部分生活状态的微生物 全部微生物 芽孢和孢子能否被消灭 不能 能

三、微生物的纯化培养及菌种的保藏

1原理:在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 2．制备固体培养基的流程计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板 3．纯化大肠杆菌的方法

常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。

(1) 平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培

养基的表面。(如下图示)

(2)稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。( 如下图所示)

①系列稀释操作(如下图所示) ②涂布平板操作(如下图所示)

(3)两种纯化细菌的方法的比较

项目 平板划线法 稀释涂布平板法 优点 可以观察菌落特征，对混合菌进行分离 可以计数，可以观察菌落特征 缺点 不能计数 吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延 适用范围 适用于好氧菌

适用于厌氧菌和兼性厌氧菌 4.培养：接种后的培养皿放入恒温箱内培养 5．菌种保藏 (1)临时保藏

操作：采用固体斜面培养基，菌落长成后，放入4 ℃冰箱中保藏，以后每3～6个月，??转移一次新的培养基

?缺点：保存时间不长，菌种易被污染或?? 产生变异

(2)长期保存法：甘油管藏法，放在－20_℃下保存 特别提醒 (1)配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项

①倒平板的适宜温度是50 ℃左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。

②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 (2)平板划线操作的注意事项