《植物生理学研究法》
（设计实验方案、实验报告、课程论文）
专业年级 2011级生物科学
（生物学基地班) 姓 名 连伟波 学 号 3115403030 任课教师 柯 玉 琴 教授 开课时间 2013~2014学年第2学期
设计实验方案、实验报告、课程论文(75%) 姓 名 实验 设计 10% 连伟波 预习报告30% 实验结果30% 1.观察记载 2.原始数据记录 3.结果计算 协作精神 课程论文30% PPT汇报10% 技能15% 成 绩 生命科学学院《植物生理与分子生物学实验室》
《植物生理学研究法》
(课程实习)
论文题目：水杨酸对低温胁迫下花生种子的
萌发及生理活性的影响
目 录
一、《植物生理学研究法》实验设计方案 .......................... 2 二、 生理指标预习报告 ....................................... 4 实验一 种子发芽率的统计 ................................. 4 实验二 苯丙氨酸解氨酶活性的测定 ......................... 4 实验三 愈创木酚法测定过氧化物酶活性 ...................... 6 实验四 氮蓝四唑法测定超氧化物歧化酶活力 ................... 7 实验五 淀粉酶活性的测定 .................................. 9 实验六 丙二醛含量的测定 ................................. 11 实验七 植物组织中可溶性蛋白质含量的测定................... 12 三、 实验现象观察记载及原始数据记录表 ....................... 13 四、撰写科技论文 ........................................... 22
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一、《植物生理学研究法》实验设计方案（10分） 论文题目 水杨酸对低温胁迫下花生种子萌发极其生理特性的影响 小组成员 陈芸（组长）、吴炜、连伟波 得分： 选题依据： 花生，原名落花生（Arachis hypogaea），是世界重要的油料作物和经济作物，特别在广大发展中国家，花生是重要的食用蛋白和食用植物油源。我国花生的种植区域主要分布在北纬 18°～ 40°、东经 100°以内的亚热带和温带地区，集中在华北平原、渤海湾沿岸和华南沿海地区及四川盆地。而温度是影响花生生长发育的重要因素之一，花生播种后常遭遇低温威胁，如发生在长江流域的“倒春寒”、华南地区的“秋季冷害”、两广地区的“寒露风”、东北地区的“低温冷害”等均使花生生长缓慢、干物质积累减少，轻者延缓花生萌发和幼苗生长发育，重者大部分种子丧失发芽能力，造成出苗不齐、苗势弱、出苗时间延长等不良后果。在我国北方花生产区，春花4月中下旬选 题 依 据 及 实 验 设 计 播种，遇寒流即发生大面积低温烂种，导致严重减产。 水杨酸（Salicylic acid，SA ）即邻羟基苯甲酸，是 一种广泛存在于植物体内的小分子酚类化合物，不仅是植物抗病反应的信号分子，也是植物对非生物逆境反应的抗性信号分子。研究证实，外源 SA能提高植物的抗寒性，它可以通过抑制脂膜 过氧化来维持细胞膜的完整性，但目前关于外源 SA对花生抗寒性能的影响尚未见报道。 本研究以福建省广泛播种的花生品种为试材，探讨了其种子萌发的适宜温度，以及在低温逆境下外源SA对其种子萌发抗寒性的影响，通过测定花生种子在萌发期改变的各种特征酶的活性及一系列与萌发相关的生理指标，从而探寻不同浓度的外源SA对花生种子萌发抗寒的影响，以期为花生种子萌发过程中低温冷害问题的解决提供理论依据。
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实验设计： 参考文献： ? 张凤银，雷 刚，张 萍，孙彩云.水杨酸对低温胁迫下藜豆种子萌发和幼苗生理特性的影响[J].西北农林科技大学学报，2001，（4）40 ? 唐月异，王传堂，高华援，等. 花生种子吸胀期间耐低温性及其与品质性状的相关研究[J]. 核农学报，2011，25(3) :0436 ～ 0442 ? ? 张浩，张雅君，丁艳，等.花生发芽过程中主要生理指标及蛋白质代谢变化[J].食品科学，2013，19:311~316 罗 虹, 周桂元, 黄 斐，等.水杨酸对花生种子及幼苗几种酶活性的影响[J].花生学，2002, 31( 2) : 7~ 9 王学奎.植物生理生化实验原理和技术[M]，北京：高等教育出版社，2006.5:172-173 ? 需 要 测 定 的生理 指 标 及方法 实验一 统计发芽种子数量，计算发芽率 实验二 测定不同浓度SA处理花生种子苯丙氨酸解氨酶活性 实验三 测定不同浓度SA处理花生种子过氧化物酶（POD）活性 实验四 测定不同浓度SA处理花生种子超氧物歧化酶（SOD）活性 实验五 测定不同浓度SA处理花生种子淀粉酶活性 实验六 测定不同浓度SA处理花生种子丙二醛（MDA）含量 实验七 测定不同浓度SA处理花生种子可溶性蛋白含量 指导老师对实验设计方案的意见： 指导老师签名： 年 月 日
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二、生理指标预习报告
实验一 种子发芽率的统计
(一) 原理：
植物种子的发芽温度可以从0-40℃的范围，但每一种植物都有其发芽适温，也就是最适合于发芽的温度。植物的发芽适温因原产地而异，一般而言，温带植物以15-20℃为最适，亚热带及热带植物以25-30℃为适。而本次采用的花生种子的发芽温度为15-25℃之间。探究温度对花生发芽率的影响在实际生产应用中具有重要的意义。
(二) 植物材料：不同浓度SA处理的花生种子
(三) 仪器设备：
1、可控温度箱； 2、小篮子； 3、 塑料袋； 4.、烧杯； (四) 试剂配制：
1、 2.5mmol/L的水杨酸母液：0.3453g用少量的乙醇溶解后，配制成1000mL体积。
(五) 实验步骤及注意事项：
1、采用0、0.5、1.0、1.5、2.0mmol/L的水杨酸浸泡花生种子，每个浓度100颗，浸泡时间5h，温度13℃。
2、将每组浸泡完的种子分为3篮放置于13℃的温度条件下培养7d后转移室温下培养5d。 3、洗净花生表面的沙子，统计花生的出芽状况，计算花生的出芽率。 （六）实验计算：
种子发芽率=（发芽种子数/供测试种子数）×100%
实验二 苯丙氨酸解氨酶活性的测定
(一) 原理：
苯丙氨酸解氨酶（phenylalanineammonialyase，PAL）催化苯丙氨酸的脱氨反应，使NH3释放出来形成反式肉桂酸。此酶的在植物体内次生物质（如木质素等）代谢中起重要作用。根据其产物，反式肉桂酸在290nm处吸光度的变化可以测定该酶的活性。
(二) 植物材料：不同浓度SA处理的花生种子
(三) 仪器设备：
1、 紫外分光光度计； 2、 冷冻高速离心机； 3、 研钵； 4.、移液枪； 5、试管； 6、试管架 ； 7、枪头
(四) 试剂配制：
1、 pH 8.8 的0.05mol/l硼酸盐缓冲液（2500ml）： A液: 0.05mol/l硼砂（2000ml）：38.14g硼砂用蒸馏水定容至2000ml； B液：0.2mol/l硼酸（1000ml）：12.37g硼酸用蒸馏水定容至1000ml。 A液取1750ml + B液750ml 即为pH 8.8 的0.05mol/l硼酸盐缓冲液。 2、 0.6mmol/L苯丙氨酸：0.6mmol/L×0.5×165.19=0.0496g/L
称取0.0496g L-苯丙氨酸溶于500ml上述缓冲液中。
3、提取液：预冷的 0.1mol·L – 1 硼酸- 硼砂缓冲液[pH 8. 8,含1 mmol·L - 1 EDTA、5 mmol/L 巯基乙醇、1% (体积分数) PVP]
4、提取液配法：2000ml pH 8.8 0.05mol/l的硼酸钠缓冲液中加入：巯基乙醇0.703ml、EDTA0.292g、
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生理生化实验论文—连
