利用分泌型荧光素酶体外长期监测小鼠肝脏microRNA活性

利用分泌型荧光素酶体外长期监测小鼠肝脏microRNA活

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王刚;董小岩;胡键阳;田文洪;尉迟捷;王岳;吴小兵

【期刊名称】《中国科学》 【年(卷),期】2011(041)004

【摘要】活体动物microRNA（miRNA）检测技术对阐明miRNA的生物学功能非常重要.但是,目前缺乏一种方便灵敏的实时反映活体动物miRNA活性及其变化的体外监测手段.通过在分泌型荧光素酶Gluc（Gaussia princeps luciferase）mRNA的3′非翻译区插入相应miRNA的靶序列构建一系列miRNA传感器.将miRNA传感器体外转染培养细胞和通过水动力注射方法转染小鼠肝脏,通过检测细胞培养上清和外周血液中的Gluc来反映细胞内和活体动物肝脏的miRNA活性.结果显示,CMV启动子驱动的miRNA传感器可以长期监测体外培养细胞中的miRNA和短期监测小鼠肝脏的miRNA,但由于启动子在肝脏的沉默不能用于长期监测肝脏miRNA;CAG启动子驱动的传感器则成功地实现了对肝脏内源性miR-122,miR-142和miR-34a以及对肝脏过表达的miR-34a的长期实时监测.利用以Gluc为报告基因的miRNA传感器,通过检测外周血Gluc可以方便地在体外长期连续监测小鼠肝脏的miRNA. 【总页数】8页(P.273-280)

【关键词】microRNA传感器;分泌型Gaussia荧光素酶;体外监测 【作者】王刚;董小岩;胡键阳;田文洪;尉迟捷;王岳;吴小兵 【作者单位】 【正文语种】英文