《鲜烟叶样品的制备 液氮法》编制说明
1 工作简况
1.1 任务来源
本项目是由国家烟草专卖局2012年下达的烟草行业标准制定计划（国烟科[2012]118号），合同号为2012B062。 1.2 项目承担单位、协作单位及主要分工
该标准项目的牵头承担单位为中国烟草总公司郑州烟草研究院（杨军），协作承担单位为云南省烟草农业科学研究院（崔国民）。中国烟草总公司郑州烟草研究院主要负责标准项目的总体统筹和协调，指导实施方案制定以及标准制定的各项具体工作；云南省烟草农业科学研究院负责烟草调制过程鲜烟叶样品的制备技术研究。 1.3 主要工作过程
本标准制定工作于2012年4月签订项目合同。 2012年6月 制定完成了鲜烟叶样品采集制备方案；
2012年9月 完成大田关键生育期鲜烟叶样品采集工作，共采集样品903个；同期完成烘烤过程鲜烟叶样品的采集工作，共采集样品96个；
2012年12月 完成大田鲜烟叶样品代谢组学和分子生物学试验研究；完成烘烤试验鲜烟叶样品淀粉和蛋白质含量的检测；
2013年1月 撰写“鲜烟叶样品制备 液氮法”标准文本的草稿
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及年度试验总结报告；
2013年3月 完成代谢组学和分子生物学补充实验；
2013年4月 根据补充实验研究结论对鲜烟叶样品采集制备方案进行修正和完善，形成初稿；
2013年5月 邀请有关专家对“鲜烟叶样品制备 液氮法”标准文本及研究报告进行完善；形成征求意见稿。 1.4 标准主要起草人及其所做的工作
根据“全国烟草标准化技术委员会制、修订工作细则”的要求，由承担单位组织了林福呈、杨军、崔国民、金立锋、魏春阳、李锋、王燃、罗朝鹏、武明珠等起草人为主的起草小组，负责该标准的起草工作。其中，项目负责人杨军负责标准制定的各项具体工作；林福呈负责项目的总体协调和技术指导；崔国民与魏春阳负责标准项目协调、标准条款起草；崔国民负责烟草调制过程鲜烟叶样品的制备技术研究；金立锋、魏春阳、李锋、王燃、罗朝鹏、武明珠、赵高坤、黄维等负责样品采集、制备、分析检测研究与验证。
2 相关领域的国、内外标准研究和制修订情况
目前，与烟草鲜烟叶采集制备尚没有完善或发布的相关国家标准，烟草基因组重大专项的实施需要大量新鲜烟叶样本的采集制备、分析等工作，重大专项需要行业内外多家实验共同参与，为保证样本的后期样本数据的通用性，需要对烟叶样本进行统一标准化的采集、制备、运输、保存。因此，目前亟须建立行业内外通用的鲜烟叶样品
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的制备标准，同时经过两年多代谢组学及表达谱样品制备实践，项目组已经具备制定规范的烟叶样本的条件。
该标准将对烟草基因组计划重大专项及行业其他需要采集鲜烟叶的样本进行严格规范，鲜烟叶样本采集制备将更加统一，对于不同实验室后期数据交流与共享具有重要意义。目前，国外无相关的标准研究。
3 标准制定的原则及主要内容确定的依据
3.1 标准适用范围
本标准规定了烟草生育期和烘烤过程中鲜烟叶样品采集、制作、保存和运输的技术要求。
本标准适用于烤烟、白肋烟和香料烟，其他类型烟草可参照使用。 3.2 标准编制原则
标准的制定，能够为最大限度减小烟草鲜烟叶取样过程和样品运输保存过程的代谢物及RNA等含量变化为技术参考，确保实验室所用样本最大限度体现烟叶样本的原有理化特性，从而真实反应烟叶生理变化规律。
3.3 标准主要内容确定的依据
烟草是重要的模式作物及经济作物，代谢物是烟草品质及香气的主要物质基础，蛋白质、DNA、RNA及是烟叶品质形成的可调控体内因子，烟草基因组学暨主要从这四个层面研究烟草品质形成机理、探讨建立有效调控手段。这些物质研究材料主要是新鲜烟叶样本，同
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时为了研究的实用性，大部分研究取材直接从大田进行取样，取样点遍布全国，取样点距离实验室较远，需要长距离运输回到实验室。
鲜烟叶样品制备规程是获得好的生物学（尤其是“组学”）数据的前提。烟草中各类物质包括DNA、RNA、蛋白质及代谢物都容易受环境的影响，在实际分析过程中，包括取样、运输、保存和样品制备对各种生物组分分析影响非常关键，很多文献和不同实验室的经验都证明了这一点。因此，一个好的实验操作流程是获得真实数据的前提，不同的实验室采取不同的样品制备技术会获得大相径庭的结果，所以非常有必要确定烟草鲜烟叶样品制备规程。
烟草鲜烟叶样品制备规程是获得归范、可比、标准数据的前提，有利于不同研究单位的数据对接。随着烟草基因组的测序和重大专项的展开，越来越多的研究单位开展以鲜烟叶为样本有关的生物学研究，不同单位可能采用不同的样品制备方法，有的单位对怎样进行样品制备还存在疑惑，不同单位获得的数据之间的可比性较差，浪费了实验经费和时间，所以有统一的鲜烟叶样品制备规范不仅给各研究单位提供的准确实用的取样方法，而且可以有效利用不同研究层面的研究数据，实现不同项目组实验数据的可比、交流、共享。
我们这两年来通过开展烟草代谢组学项目与烟草表达谱项目，已经制定了一套严格完整的鲜烟叶取样规程，实验结果分析表明取样时间尽量缩短（控制在10 min之内），样品取下标记后迅速浸入液氮，完全速冻后，采用干冰完全包埋尽快（长途使用航空）运回实验室，-80℃保存，可以保证样本中总代谢物及总RNA基本不变。
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标准的制定根据“全国烟草标准化技术委员会制、修订工作细则”的要求，严格按照国家行业标准制定程序及格式开展标准制定工作。
标准制定的具体依据详见标准技术验证报告。 3.4 本标准在标准技术内容、水平方面的情况
本标准为新制定的烟草行业标准。
本标准是在两年来烟草代谢组学及表达谱项目鲜烟叶样品采样实践和数据分析基础上制定的。本标准的术语、定义、适用范围等方面，符合现有的烟草代谢组学和生物学科学研究实际，有利于促进烟草基因组计划工作高效、规范、有序进行。
本标准的制定和发布实施，对基因组重大专项有关鲜烟叶样本制备规程、确保基因组重大专项项目数据真实可靠、交叉使用及共享具有重要意义。
4 标准预期产生的社会、经济效益
本标准为国家烟草专卖局标准制订项目，本标准适用于烟草代谢组学和生物学研究的科研单位。本标准发布实施后，将使基因组重大专项及涉及鲜烟叶样本其他项目样本采集规范化，保证烟草生物学研究数据真实、可靠，促进不同实验室开展数据交流及共享。
5 采用国际标准和国外先进标准的情况
本标准为新制定的烟草行业标准，未采用相关国际标准。目前烟草生物相关研究尚没有相关标准。
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《烟叶标准样品》国家标准编制说明 - 中国烟草标准化
