实验五 微生物培育基的配制和灭菌
培育基是将微 生物生长繁衍所需要的各类营养物质，用人工方式配制而成的各类营养基质。培育基为微生物的生长提供营养物质和生存空间。它具有微生物正常生活所需的各类养料和适宜的环境条件；（1）适当组分和比例的营养物质；（2）适宜的pH值；（3）适合的渗透压；（4）维持无菌状态。所以培育基是培育微生物所必需的最主要材料。培育基的配制是微生物学工作者的主要技术操作之一。
培育基的种类：
按照培育基的组成成份，可将培育基分为三类： 合成培育基：由各类纯化学物质按必然比例配制而成。
半合成培育基：由一部份纯化学物质和另一部份天然物质配制而成。 天然培育基：利用天然来源的有机物配制而成的。 从培育基的物理状态来分：
液体培育基：不加凝固剂的液态状培育基。
固体培育基：在液体培育基中加入2％左右的凝固剂的固体状培育基或固体状农副产品培育基。
半固体培育基：在液体培育基中加入％％凝固剂而成的半固体状培育基。
微生物最常常利用的凝固剂为琼脂（第二为明胶），又叫洋菜、冻粉。它不是一种营养物质，只能被极少数种类的细菌分解利用。琼脂是从海藻中（主如果石花菜）提取而制成的。是一种多糖类化合物，主要成份是复杂的多糖硫酸酯钙盐，琼脂是一种可逆性胶体，在常规浓度下加热到96C以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42℃以下，又凝固为固体。
一、目的要求
l. 了解培育基的配制原理和方式，掌握其配制进程。
2. 了解几种灭菌方式，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其利用方式。 3. 熟悉分离、培育微生物前的有关预备工作及操作方式。
二、实验材料
1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O等。
2. 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。
3. 其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培育血、吸管、各类包装纸防水纸、绳索、棉花、标签等。
三、实验程序
（一）、培育基配制
l. 培育基配制的一般方式和步骤
（1）称量：依照培育基配方，正确称取各类原料放于搪瓷杯中。
（2）溶化：在搪瓷杯中加入所需水量（按如实验需要加入蒸馏水或自来水），用玻棒搅匀，加热溶解。
（3）调pH值（调pH也能够在加琼脂后再调），用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对照。
表 6-1 琼脂和明胶的特性比较
（4）加琼脂溶化，在琼脂溶化进程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培育基溢出或烧焦，待完全溶化后，补足所失水分，一般数量少，时刻短没必要补水。
（5）分装：在漏斗架上分装。按照不同的需要进行分装，一般制斜面的装置为管高的1／5 特别注意不要使培育基粘污在管（瓶）口上以避免浸湿棉塞，引发污染。
（6）包扎成捆、挂上标签。培育基分装好后，塞上棉塞，用防水纸包扎成捆挂上所配培育基名称的标签。
（7）灭菌备用。灭菌后如需制成斜面的，应在下磅后掏出，摆成斜面（见图6-1）。培育基经灭菌后，必需放在37℃恒温培育箱中培育 24h，如确无菌生长、方可利用。
图6-1 灭菌的试管培育基趁热摆成斜面
2．三种培育基的配方及具体配制方式
（1）. 牛肉膏蛋白陈琼脂培育基（用于分离和培育细菌，是一种天然培育基）。 配方： 牛肉膏 3g 琼脂20g
蛋白胨 5g 自来水1 000mL
氯化钠3g ~
灭菌l.05kg／cm2，25~30min
本实验将原配方配成各类浓缩液。各类浓度如下：30％牛肉膏、50％蛋白胨、30％氯化钠。以配制200mL培育基为例。
吸取30％牛肉膏2mL；50％蛋白胨2mL；30％氯化钠2mL；加入有刻度的搪瓷烧杯中，然后用自来水补足到200mL。用玻棒搅匀，在电炉上略加热，调 pH至 ，加琼脂4g，加热熔化，用玻棒不断搅拌，至琼脂完全溶解为止，趁热在漏斗架上装试管，（见图6－2）。装带有棉塞的无菌试管，装置1／5的试管高度共12支，作斜面培育基、用铝壳试管帽的里装10mL。约试管高度的 1／2以上，用作分离时倒平板用。
实验五微生物培育基的配制与灭菌
