嗜水气单胞菌丝氨酸羟甲基转移酶基因的克隆及酶学分析

嗜水气单胞菌丝氨酸羟甲基转移酶基因的克隆及酶学分析

黄飞;吴高兵;黄小罗;洪玉枝

【期刊名称】《农业生物技术学报》 【年(卷),期】2010(018)004

【摘要】以嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)基因组DNA为模板,通过PCR方法首次克隆了该菌的丝氨酸羟甲基转移酶基因(glyA).将该基因插入到表达载体pGEX-6p-1中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α,获得含有重组质粒pGEX-glyA的重组菌株.核苷酸序列测定表明该基因(GenBank登录号:FJ797607)全长1 254 bp,编码417个氨基酸.重组菌株IPTG诱导表达后,经过GST-tag亲和层析纯化,得到约45 kD的目的蛋白.对纯化的丝氨酸羟甲基转移酶进行酶学性质分析表明,该酶的最适反应为pH 8.0,最适反应温度为20℃,Cu2+和Mn2+对该酶有激活作用,而Zn2+和SDS对该酶有抑制作用.由于该酶的最适反应温度是20℃,使得它在工业上具有一定的应用价值,同时有助于对低温酶机制的研究. 【总页数】5页(783-787)

【关键词】丝氨酸羟甲基转移酶;亲和层析;嗜水气单胞菌 【作者】黄飞;吴高兵;黄小罗;洪玉枝

【作者单位】农业微生物学国家重点实验室,华中农业大学植物科学技术学院,武汉,430070;农业微生物学国家重点实验室,华中农业大学植物科学技术学院,武汉,430070;农业微生物学国家重点实验室,华中农业大学植物科学技术学院,武汉,430070;农业微生物学国家重点实验室,华中农业大学植物科学技术学院,武汉,430070