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检验操作规程
题目：使君子原药材检验操作规程 编号：TS-GC-YL-20550-02 制定人： 制定日期2020 年 月 日 版本：2 页数：1/3 审核人： 审核日期2020 年 月 日 颁发部门：质 量 部 批准人： 批准日期2020年 月 日 生效日期2020 年 月 日 目的：规范使君子原药材检验操作 范围：使君子原药材检验 分发部门： 质量部、 化验室、生产部 标 题 正 文 1 标准依据：《中国药典》2020年版一部及四部 2 【性状】 2.1 仪器：直尺。 2.2 方法：取本品,置日光下观察,并用直尺测量:本品呈椭圆形或卵圆形，具 5条纵棱，偶有4～9棱，长2.5～4cm，直径约2cm。表面黑褐色至紫黑色，平滑，微具光泽。顶端狭尖，基部钝圆，有明显圆形的果梗痕。质坚硬， 横切面多呈五角星形，棱角处壳较厚，中间呈类圆形空腔。种子长椭圆形 或纺锤形，长约2cm，直径约1cm；表面棕褐色或黑褐色，有多数纵皱纹； 种皮薄，易剥离；子叶2，黄白色，有油性，断面有裂隙。气微香，味微甜。 【鉴别】 3 （1）显微鉴别 3.1 仪器与试剂：生物显微镜、酒精灯，水合氯醛、稀甘油等。 3.1.1 方法：取本品适量，用水合氯醛装片，置显微镜下观察：1）本品粉末 3.1.2 棕色。种皮网纹细胞较多，椭圆形或不规则形，壁稍厚，具密集网状纹孔。 果皮木化细胞众多，纺锤状、类椭圆形或不规则形，多破碎，壁稍厚，具 密集纹孔。果皮表皮细胞黄棕色，表面观呈多角形。种皮表皮细胞黄色至 黄棕色，表面观呈类长方形或多角形，有的内含黄棕色物。纤维直径7～34 μm，多成束。草酸钙簇晶，直径5～49μm，散在或存在于子叶细胞中。 （2）薄层鉴别 3.2 3.2.1 仪器与试剂：分析天平、数显恒温水浴锅、电热鼓风干燥箱、层析缸、硅胶G薄层板、乙酸乙酯、石油醚（30～60℃）等。 方法：（2）取本品粉末1g，加乙醚20ml，超声处理10分钟，滤过，3.2.2 滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。另取使君子仁 对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验， 吸取上述两种溶液各1～2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚 （30～60℃）-乙酸乙酯（4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10% 硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药 材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 【检查】 4 水分 不得过 13.0% （ 通则 0832 第二法 ） 4.1 4.1．1 仪器：电热鼓风干燥箱、分析天平、粉碎机、药筛等。 4.1.2 方法：取供试品2～5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不 超过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定，开启瓶盖在100～105℃干
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4.1.3 燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，放冷，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（％）。 计算公式： W样+W0－W1 样品含水量% = ×100% 式中： W样 W0 ---------------------------- 称量瓶的重量（g）。 W1 --------------------------- 称量瓶与样品的重量（g）。 W样 --------------------------- 样品的重量（g）。 4.2 黄曲霉毒素 照真菌毒素测定法（通则2351）测定。 本品每1000g含黄曲霉毒素B1不得过5μg，黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素 G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉毒素B1的总量不得过10μg。 4.2.1 仪器与试剂：光化学衍生器、离心机、荧光检测器检测等 本法系用高效液相色谱法（通则0512）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒 素（以黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2总 量计），除另有规定外，按下列方法测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲4.2.2 醇-乙腈-水（40:18:42）为流动相；采用柱后衍生法检测，①碘衍生法：衍 生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释 至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃；②光化 学衍生法：光化学衍生器（254nm）；以荧光检测器检测，激发波长λex=360nm （或365nm），发射波长λex=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。 混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲霉 毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为 1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇 稀释至刻度，作为贮备溶液。精密量取贮备溶液1ml，置25ml量瓶中，用 甲醇稀释至刻度，即得。 供试品溶液的制备 取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，置
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4.2.3 4.3 4.3.1 4.3.2
于均质瓶中，加入氯化钠3g，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 测定法 分别精密吸取上述混合对照品溶液5μl、10μ1、15μl、20μl、25μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液20～25μ1，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的量，计算，即得。 计算公式：X=(A供?b)?f?1000k?M样?V 二氧化硫残留量：照二氧化硫残留量测定法（通则 2331)测定，不得过150mg/kg 仪器与试剂：两颈圆底烧瓶、电热套、竖式回流冷凝管、磁力搅拌器、分析天平、甲基红乙醇溶液指示剂、氢氧化钠滴定液滴、盐酸溶液（6mol/L)等。 方法：测定法取药材或饮片细粉约10g(如二氧化硫残留量较髙，超过1000mg/kg，可适当减少取样量，但应不少于5g),精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水300?400ml。打开回流冷凝管开关给水，将冷凝管的上端二氧化硫气体导出口处连接一橡胶导气管置于100ml锥形瓶底部。锥形瓶内加入3%过氧化氢溶液50ml作为吸收液（橡胶导气管的末端应在吸收液液面以下）。使用前，在吸收液中加人3滴甲基红乙醇溶液指示剂（2.5mg/ml),并用0.Olmol/L氢氧化钠滴定液滴定至黄色（即终点；如果超过终点，则应舍弃该吸收溶液）。开通氮气，使用流量计调节气体流量至约0.2L/min；打开分液漏斗的活塞，使盐酸溶液（6mol/L)10ml流入蒸馏瓶，立即加热两颈烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸；烧瓶内的水沸腾1.5小时后，停止加热。吸收液放冷后，置于磁力搅拌器上不断搅拌，用氢氧化钠滴定（O.Olmol/L)滴定，至黄色持续时间20秒不褪，并将滴定的结果用空白实验校正。 计算公式： 第 3 页 共 4 页
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4.3.3 5 5.1 5.2 5.3 （V供-V空）×C×0.032×106 二氧化硫残留量（mg/kg） = W供 式中： V供为供试品溶液消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； V空 为空白消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； C 为氢氧化钠滴定液的浓度，mol/L； W供为供试品的重量，g。 0.032为lml氢氧化钠滴定液（lmol/L)相当的二氧化硫的质量，g。 【含量测定】 照高效液相色谱法（通则0512）测定。本品种子含胡芦巴碱（C7H7NO2）不得少于0.20%。 仪器与试剂：电子分析天平、高效液相色谱仪、甲醇、乙腈等。 色谱条件与系统适用性试验 以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（80：20）为流动相；检测波长为265nm。理论板数按胡芦巴碱峰计算应不低于4000。 对照品溶液的制备 取胡芦巴碱对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 取本品种子粉末（过二号筛）约 0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇20ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品种子含胡芦巴碱（C7H7NO2）不得少于0.20%。 计算公式： A样 × C对 ×f 含量% = ×100% m ×（1－水分）×A对 式中： A样 ------------------------- 样品的面积。 A对 ------------------------ - 对照品的面积。 C对 ------------------------- 对照品的浓度(mg/ml)。 m ------------------------- 样品的重量（g）。 f ------------------------- 稀释体积。
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YL-20550使君子原料检验操作规程
