令狐文艳
生物化学实验报告
令狐文艳
姓 名： 学 号： 专业年级： 组 别：
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称 实验日期 合作者 评分
教师签名
蛋白质含量测定——双缩脲试剂法
实验地点 指导老师
批改日期
一、实验目的
1.1.掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理、操作； 1.2.掌握双缩脲试剂的配制； 1.3.熟悉血清总蛋白的临床意义；
1.4.了解双缩脲法测定血清总蛋白的特点和注意事项。 二、实验原理
2.1.两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2），因分子内含有两个邻接的肽键，在碱性溶液中可与Cu2+发生双缩脲反应，生成紫红色络合物。
2.2.蛋白质分子含有大量彼此相连的肽键（-CO-NH-），
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同样能在碱性条件下与Cu2+发生双缩脲反应，生成的紫红色络合物，且在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10～120g/L范围内有良好的线性关系。 三、材料与方法：
3.1.实验材料：
3.1.1.实验试剂：①小牛血清；②6.0mol/LNaOH溶液；③双缩脲试剂:硫酸酮、酒石酸钾钠、碘化钾；④蛋白质标准液（70g/L）；⑤0.9%NaCl；⑥蒸馏水。
3.1.2.实验器材：①试管；②烧杯；③容量瓶；④加样枪；⑤刻度吸管；⑥玻璃棒
；⑥1100分光光度计；⑦电子天平；⑧水浴锅。
3.2.实验步骤
取3支试管，做好标记，按下表操作： 加入物（ml） B（空白） S（标准） U（待测） 小牛血清（1:10） - - 0.5 蛋白质标准液（1:10） - 0.5 - 0.9%Nacl 0.5 - -
双缩脲试剂 4.0 4.0 4.0
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a.各管混匀，观察各试管颜色； b.将各试管置于37℃水浴锅中加热20min，观察颜色； c.将试管中的液体倒入比色杯中，置于1100分光光度计的样品槽内，在波长540nm，以空白管调零，测S和U管吸的光度； d.测定结束后，将比色杯中的样品回收进试管。 依
据
公
式
算
出
结
果
：
血清总蛋白（g/L）?AU?蛋白质标准液浓度（g/L）AS
四、结果与讨论：
4.1.实验现象：
①选取三支洁净无损的试管，从左往右依次加入0.9%氯化钠溶液、蛋白质标准液、相应的小牛血清各0.5ml，分别命名为B试管、S试管和U试管，再分别向三支试管内加入4ml的双缩脲试剂，溶液均成蓝色透明状。
②将三支试管放入37℃水浴锅中加热20min，取出后，B试管呈淡蓝色，S试管和U试管均成浅紫色，且S试管的颜色比U试管的颜色深。（如图一）
图一 水浴后三支试管颜色 图二 分光计读数
4.2.实验数据 测定次数 管号 1 2 3 平均吸光度 S 0.185 0.184 0.185 0.1847
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蛋白质含量测定——双缩脲试剂法 实验报告之令狐文艳创作
