高羊茅叶绿体表达载体构建及绿色荧光蛋白基因瞬时表达检测

高羊茅叶绿体表达载体构建及绿色荧光蛋白基因瞬时表达

检测

赵彤;于荣;黄丛林;王永勤;张秀海;吴忠义

【期刊名称】《中国农业科学》 【年(卷),期】2009(042)003

【摘要】[目的]验证高羊茅叶绿体表达载体在高羊茅叶绿体中的瞬时表达情况,为今后在高羊茅叶绿体中稳定表达该载体,获得耐早高羊茅的叶绿体转基因株系奠定基础.[方法]首先从高羊茅草叶绿体基因组中克隆16S/trnI-trnA/23S片段,作为定点整合同源片段.然后将耐旱相关基因酵母海藻糖合酶基因tps1与水稻叶绿体16S rRNA基因的强启动子Prrn,烟草叶绿体基因psbA的终止子构建表达盒(Prrn-tps1-TpsbA-ter),连同草丁膦抗性基因bar表达盒、卡那霉素抗性基因nptII和绿色荧光蛋白基因gfp构建的融和基因表达盒一起克隆到定点整合同源片段之间,构建高羊茅叶绿体的稳定表达载体gTKGB.通过基因枪轰击法将gTKGB转化到高羊茅幼嫩叶片中,用激光共聚焦扫描显微镜对GFP的表达情况进行检测分析.[结果]克隆的高羊茅叶绿体基因16S-trnI-trnA-23S在NCBI登录号为:0Q490947-DQ490950.构建的叶绿体表达载体gTKGB转化高羊茅幼嫩叶片,在叶绿体中有很好的GFP表达.[结论]高羊茅叶绿体表达载体gTKGB可用于高羊茅叶绿体转化. 【总页数】7页(1116-1122)

【关键词】高羊茅;叶绿体表达载体;定点整合;重叠延伸PCR法;瞬时表达;GFP荧光

【作者】赵彤;于荣;黄丛林;王永勤;张秀海;吴忠义