脊髓源星形胶质细胞GFAP表达抑制真核表达载体构建及
最佳短发夹样RNA分子筛选
李振宇;高明勇;肖建德;闫洪印
【期刊名称】《中华神经医学杂志》 【年(卷),期】2007(006)011
【摘要】目的 构建并筛选大鼠胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达抑制短发夹样RNA(shRNA)真核表达载体.方法 针对GFAP基因全编码序列设计并合成三对9 bp茎环结构、19bp干扰序列特异性shRNA模板,体外定向克隆构建特异性重组质粒真核表达载体;通过体外大鼠脊髓源星形胶质细胞GFAP表达抑制模型,脂质体介导RNA干扰分子转染,实时荧光定量RT-PCR及Western blot技术观察RNA干扰后原代星形胶质细胞GFAP表达抑制效果,筛选最佳GFAP表达干扰抑制真核表达载体.结果 序列测定证实GFAP-shRNA重组质粒真核表达载体构建成功,三对shRNA模板在mRNA及蛋白表达水平抑制靶基因表达效率分别为81%、63%、56%.结论 高效率的GFAP-shRNA真核表达载体在大鼠原代星形胶质细胞GFAP表达抑制模型中能高效抑制GFAP基因表达,为后续多靶点RNA干扰技术在脊髓损伤胶质瘢痕抑制基因治疗中的应用奠定了前期基础. 【总页数】4页(1085-1088)
【关键词】胶质原纤维酸性蛋白;RNA干扰;小干扰RNA 【作者】李振宇;高明勇;肖建德;闫洪印
【作者单位】518035,深圳,南方医科大学附属深圳医院脊柱外科;518035,深圳,南方医科大学附属深圳医院脊柱外科;518035,深圳,南方医科大学附属深圳医院脊柱外科;518035,深圳,南方医科大学附属深圳医院脊柱外科
【正文语种】中文 【中图分类】Q78 【相关文献】
1.脊髓源星形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白表达抑制最佳短发夹样RNA分子筛选及真核表达载体构建 [J], 高明勇; 李振宇; 闫洪印
2.大鼠谷氨酰胺合成酶RNA干扰表达载体的构建及其影响星形胶质细胞黏附的初探 [J], 刘春兴; 张滨; 邹健
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4.靶向髓样细胞表达的激发受体1基因短发夹RNA真核质粒表达载体的构建及筛选 [J], 莫红缨; 黎毅敏; 肖正伦; 黄红川; 杨淳; 何为群; 刘晓清
5.构建RNA干扰真核表达载体抑制肝癌细胞IGF1R表达的研究 [J], 朱晨芳; 钟强; 顾岩
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脊髓源星形胶质细胞GFAP表达抑制真核表达载体构建及最佳短发夹样RN
