大规模测序
1.RNA测序(RNA Sequencing)—高速序列比对 2.转录组测序(Transcriptome sequencing) 3.宏基因组测序
1.转录组是指某个物种的特定组织或细胞在某一生理功能状态下所有转录的mRNA产物的集合,是基因组遗传信息传递和表达的重要步骤和过程。
高通量转录组测序可以获得大量转录本序列信息,定量基因转录表达水平,获得基因组转录区域及其位点信息等,在基因组序列拼接注释、样品间基因转录差异表达(差异表达分析为考点)及其功能研究等方面有重要作用。
1. 有参考基因组的转录组分析技术路线
推荐平台:Illumina HiSeq 2000、Illumina MiSeq 2. 无参考基因组的转录组分析
推荐平台: Roche 454 FLX+ 二、生物信息学分析 1) 有参考基因组的转录组
1. 原始数据整理、过滤及质量评估 2. 转录组测序分析 ? 与参考基因组比对 ? 蛋白编码基因的表达量分析 ? 蛋白编码基因的表达量差异分析
? 差异表达的蛋白编码基因的聚类分析(热图) ? 差异表达基因富集分析(GO、KEGG)
? SNPs的分析(SNPs鉴定、同义/非同义突变、与已有SNPs数据库比对)
? 可变剪切分析 ? UTR区域鉴定 ? 新基因/新转录本分析 3. 根据客户需求进行个性化分析 2) 无参考基因组的转录组 1. 原始数据整理、过滤及质量评估 2. 转录组测序分析: ? 序列拼装及拼装统计 ? Unigene功能注释
? Unigene的功能聚类分析(KOG、GO) ? Unigene的代谢途径分析(KEGG pathway) ? Unigene的表达量分析 ? Unigene的表达量差异分析
? 差异表达的Unigene的聚类分析(热图)
? 差异表达的Unigene的富集分析(KOG、GO、KEGG) ? SNPs的鉴定
3. 根据客户需求进行个性化分析 四、经典案例
案例1:人前列腺癌融合基因鉴定
背景:人前列腺癌发病率位于男性恶性肿瘤的首位,并且发病率近年