(3)ES细胞来源于早期胚胎和原始性腺,在功能上的特性是具有发育的全能性,即可以分化为成年动物体内任何一种组织细胞,具有增殖而不分化的特点。
(4)要通过转录方法合成含Rag2基因的DNA片段,必须以Rag2基因转录的mRNA为模板,因此可以从鼠的胎盘细胞中提取Rag2基因的mRNA。能够获取目的基因并切开质粒的限制酶有识别序列为GGATCC,只有BamHⅠ的识别序列为GGATCC,因此选用BamHⅠ限制酶切割,而后加入DNA连接酶。
(5)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体,可以根据Rag2基因的核苷酸序列设计引物并扩增Rag2基因片段。
(6)为检测Rag2基因的表达情况,可采用抗原—抗体杂交法,即提取治疗后的小鼠骨髓细胞的蛋白质(抗原),用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。 答案:(1)①②④ (2)显微操作去核法
(3)有发育的全能性,即可以分化为成年动物体内任何一种组织细胞 增殖而不分化 (4)mRNA BamHⅠ
(5)Rag2基因的核苷酸序列 (6)Rag2蛋白质
4.(2018·广东佛山教学质检一)真核生物基因中通常有内含子,而原核生物基因中没有,原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应
的RNA序列的机制。有人利用RT—PCR技术(mRNA逆转录为cDNA再进行PCR扩增),获得了牛基因G,导入到大肠杆菌中,成功表达出G蛋白。请回答下列问题:
(1)RT—PCR过程需要的酶有 。在进行PCR扩增时需要设计 种引物,引物在退火过程中与 结合。
(2)RT-PCR的产物经过BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切后,与经过同样双酶切的PBV载体连接。这步操作程序属于 ,也是基因工程的核心步骤。与单一酶切相比,双酶切具有的优点是 (答出两点)。
(3)若要检测基因G是否翻译出蛋白G,可采用的分子水平的检测方法是 。有人从牛的基因组文库中获得了基因G,同样以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白G,其原因是
。
解析:(1)RT—PCR过程需要的酶有逆转录酶和Taq酶(热稳定的DNA聚合酶)。在进行PCR扩增时需要设计2种引物,引物在退火过程中与模板链相应互补序列结合。
(2)RT—PCR的产物经过BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切后,与经过同样双酶切的PBV载体连接。这步操作程序属于构建基因表达载体,也是基因工程的核心步骤。与单一酶切相比,双酶切具有的优点是防止目的基因(载体)自身连接,防止目的基因与运载体反向连接。
(3)若要检测基因G是否翻译出蛋白G,可采用的分子水平的检测方法是抗原—抗体杂交。有人从牛的基因组文库中获得了基因G,同样以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白G,其原因是从基因组文库获取的G基因有内含子,在大肠杆菌中,其转录产物中与内含子对应的RNA序列不能被切除,无法表达出蛋白G。
答案:(1)逆转录酶和Taq酶(热稳定的DNA聚合酶) 2 模板链相应互补序列
(2)构建基因表达载体 防止目的基因(载体)自身连接,防止目的基因与运载体反向连接(任意两点)
(3)抗原—抗体杂交 从基因组文库获取的G基因有内含子,在大肠杆菌中,其转录产物中与内含子对应的RNA序列不能被切除,无法表达出蛋白G
5.(2018·湖北孝感高三第一次统考)乙肝病毒表面有抗原T1蛋白和T2蛋白,将有关抗原基因导入番茄细胞中,由此可获得用来预防乙肝的一种新型疫苗,为预防乙肝开辟了一条新途径。研究人员用农杆菌转化法培育出转基因番茄,用于生产口服的乙肝病毒疫苗,回答下列问题:
(1)在基因工程操作过程中,需要用限制酶和 酶构建基因表达载体,基因表达载体要有 ,以便筛选出含有目的基因的受体细胞。
(2)用转基因番茄生产可口服的乙肝病毒疫苗(含T1蛋白),所用的目的基因是 ,所用的运载体是土壤农杆菌的 。目
的基因进入番茄细胞内并在番茄细胞内维持稳定和表达,这个过程称为 。
(3)可利用PCR技术扩增目的基因,其前提是 ,以便根据这一序列合成引物。下列引物(用表示)设计能扩增得到含目的基因(阴影表示)的是 。
(4)获得转基因番茄植株后,通过分子检测,已确定该植株所结番茄中含有T2蛋白,此后还需要进行个体生物学水平的鉴定,例如 。
解析:(1)基因表达载体的构建需要用限制酶、DNA连接酶。基因表达载体的组成有:目的基因、启动子、终止子、标记基因,基因表达载体具有标记基因,以便筛选出含有目的基因的受体细胞。(2)由题意知,用转基因番茄生产可口服的乙肝病毒疫苗(含T1蛋白),所用的目的基因是T1蛋白基因,所用的运载体是土壤农杆菌的Ti质粒。目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为转化。(3)利用PCR技术扩增目的基因,其前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列。由图知,设计能扩增得到含目的基因(阴影表示)的是C。(4)目的基因的检测与鉴定,有时还需进行个体生物学水平的鉴定,用转基因番茄产生的T2蛋白对动物进行免疫接种实验。
答案:(1)DNA连接 标记基因 (2)T1蛋白基因 Ti质粒 转化
(3)要有一段已知目的基因的核苷酸序列 C
(4)用转基因番茄产生的T2蛋白对动物进行免疫接种实验
6.(2018·山东潍坊一模)人参是珍贵的药用植物,研究人员运用转基因技术构建乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人参细胞表达系统,为珍贵药用植物与疫苗联合应用开辟了新思路,其构建过程如图所示,图中SmaⅠ、SstⅠ、EcoRⅤ为限制酶。请回答相关问题:
(1)②的构建过程除限制酶外还需要 酶;想要从②中重新获得HBsAg基因,所用的限制酶不能是EcoRⅤ或SmaⅠ,原因是 。
(2)将重组质粒转入农杆菌常用 处理细胞;要使目的基因成功整合到人参细胞的染色体上,该过程所采用的质粒应含有 。
(3)分析图可知,②中应含有的标记基因是 ;过程⑤的目的是 。 (4)该疫苗进入机体后可刺激机体产生能与乙肝病毒特异性结合的 ,同时还能产生 使机体长期对乙肝病毒具有免疫力。
【高考生物专题复习】现代生物科技专题(备战2020)
