HuR基因克隆及其在肝癌细胞中的表达
张凯琳;汪书华;石松;饶敏;孙达权
【期刊名称】《现代肿瘤医学》 【年(卷),期】2018(026)001
【摘要】Objective:To construct the eukaryotic expression vector pEGFP - HuR and screen its stable transfect-ed hepatocellular carcinoma cells. Methods:The coding region of HuR gene sequence was amplified from SMMC -7721 cells by reversing transcription polymerase chain reaction (RT - PCR). The fragment was inserted into green fluorescent protein (GFP)expression vector pEGFP - C1 digested by Xho I and EcoR I enzymes,the same as PCR product digestion. The recombinant plasmid was transfected into SMMC - 7721 cells and the pEGFP - HuR stable transfected hepatocellular carcinoma cells were screened by G418 drug. The expression of HuR gene was detected by Western blot. Results:Both double digestion analysis by Xho I and EcoR I and DNA sequencing result verified that the pEGFP - HuR eukaryotic expression vector was successfully constructed,the HuR protein level in pEGFP - HuR stable transfection cells was obviously raised. Conclusion:The pEGFP - HuR eukaryotic expression vector was suc-cessfully constructed and HuR gene was significantly expressed in stable transfection cells,which provides the help for the study of HuR gene.%目的:克隆人抗原R基因(HuR)的cDNA,构建重组真核表达载体pEGFP-HuR,并稳定转染肝癌细胞株.方
法:应用逆转录聚合酶链反应技术,从肝癌细胞中扩增得到人HuR基因的cDNA序列,克隆至增强型绿色荧光蛋白表达载体中,经Xho I和EcoR I双酶切和DNA测序鉴定后,将重组真核表达载体通过脂质体法导入肝癌细胞中,利用新霉素(G418)筛选出稳定转染pEGFP-HuR的肝癌细胞株,并用Western blot技术检测HuR基因的表达.结果:Xho I和EcoR I双酶切和PCR结果证实真核表达载体pEGFP-HuR构建成功.Western blot结果显示,在稳定转染重组真核表达载体的肝癌细胞中HuR基因表达水平上调.结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-HuR,并筛选获得其稳定转染后HuR表达上调的肝癌细胞株,作为进一步研究HuR基因生物学功能的前期工作. 【总页数】4页(1-4)
【关键词】HuR基因;肝癌细胞;脂质体转染;真核表达 【作者】张凯琳;汪书华;石松;饶敏;孙达权
【作者单位】贵州医科大学生物化学与分子生物学教研室,贵州 贵阳 550025;贵州医科大学生物化学与分子生物学教研室,贵州 贵阳 550025;贵州医科大学生物化学与分子生物学教研室,贵州 贵阳 550025;贵州省人民医院,贵州 贵阳 550000;贵州医科大学生物化学与分子生物学教研室,贵州 贵阳 550025 【正文语种】中文 【中图分类】R735.7 【文献来源】
https://www.zhangqiaokeyan.com/academic-journal-cn_journal-modern-oncology_thesis/0201236338113.html 【相关文献】
1.Fractalkine基因真核表达质粒的构建及其在小鼠肝癌细胞中的表达 [J], 唐俐; 曾彦; 胡鹏; 彭明利; 兰英华; 任红
2.人颗粒溶素基因真核表达载体的构建及在肝癌细胞中表达的实验研究 [J], 缪家文; 李芳秋; 杨爱龙; 张春华
3.人类疱疹病毒8型K1基因的克隆及其在内皮细胞和前列腺癌细胞中的表达 [J], 闵治超; 王子盾; 糜远源; 程伟; 华立新; 冯宁翰
4.不同迁移能力肝癌细胞中干细胞相关基因Nanog、Sox2和Oct4的表达 [J], 王寒琪; 王晋星一; 陈林; 陈妮; 陈我婵; 潘娅; 洪阳; 陈腾祥
5.AFP和PTEN在肝癌细胞中的表达及AFP在全反式维甲酸诱导肝癌细胞凋亡中的作用 [J], 赵小丽; 高鹏; 刘俊华; 周凤蕊; 王佳乐; 李广明
以上内容为文献基本信息，获取文献全文请下载
HuR基因克隆及其在肝癌细胞中的表达
