阶段质量检测(二) 微生物的培养与应用(A卷 学业水平达标)
(满分：100分 时间：40分钟)
一、选择题(每小题4分，共48分)
1．平板冷凝后，要将平板倒置，其原因是( ) A．接种时再拿起来方便 B．在皿底上标记日期等方便 C．正着放置容易破碎
D．防止皿盖上的冷凝水珠落入培养基造成污染
解析：选D 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面湿度也比较高。将平板倒置，可以使培养基表面的水分更好地挥发，防止皿盖上水珠落入培养基，造成污染。
2．产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是( ) A．一个细菌、液体培养基 B．许多细菌、液体培养基 C．一个细菌、固体培养基 D．许多细菌、固体培养基
解析：选C 菌落是一个或几个细菌的子细胞群体，在固体培养基上有一定的形态，肉眼可见，而液体培养基不具备该条件。
3．需要在火焰旁操作的有( )
①土壤取样 ②称取土壤 ③稀释土壤溶液 ④涂布平板 ⑤微生物的培养 A．①②③④⑤ C．③④⑤
B．②③④⑤ D．②③④
解析：选D 为了防止杂菌污染，称取土壤、稀释土壤和涂布平板均应在酒精灯火焰旁进行，土壤取样不用在火焰旁进行，但所用器具均应先灭菌再使用；微生物的培养在恒温箱中进行，无需灭菌。
4．下列关于微生物培养的叙述，错误的是( ) A．获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵 B．高温灭菌的目的是杀死微生物的细胞、孢子、芽孢 C．划线分离可在培养基上获得均匀分布的单菌落 D．稀释涂布平板法易获得单菌落和计数活菌数目
解析：选C 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵；高温灭菌的目的是杀死微生物的细胞、孢子、芽孢；稀释涂布平板法易获得单菌落和计数活菌数目；划线分离可在培养基上获得单菌落，但不是均匀分布的。
5．下列有关平板划线接种法的操作错误的是( ) A．将接种环放在火焰上灼烧
B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液
C．在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过酒精灯火焰 D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连
解析：选D 划线时最后一区的划线与第一区的划线不能相连。
6．制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基，倒平板的具体描述正确的是( ) ①待培养基冷却至40 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板 ②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞 ③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰 ④用左手的拇指和食指打开皿盖
⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖 ⑥等待平板冷却5～10 s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上 A．①③④⑤ C．③⑤
B．④⑤⑥ D．①②④⑥
解析：选C 待培养基冷却至50 ℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板；将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，左手拔出棉塞，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，等待平板冷却凝固5～10 min后，将平板倒过来放置。
7．在农田土壤的表层自生固氮菌较多。将用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是( )
①加抗生素 ②不加抗生素 ③加氮素 ④不加氮素 ⑤加葡萄糖 ⑥不加葡萄糖 ⑦37 ℃恒温箱中培养 ⑧28～30 ℃温度下培养
A．①③⑤⑦ C．②④⑤⑧
B．②④⑥⑧ D．①④⑥⑦
解析：选C 自生固氮菌有固氮功能，因此培养基中不需要加氮素；细菌对抗生素敏感，因此，不能加抗生素；自生固氮菌是异养型的，应加葡萄糖；其生长繁殖的适宜温度是28～30 ℃。
8．若将酵母菌和圆褐固氮菌混合在一起，可采用下列哪组培养基将它们分开( ) A．加食盐的培养基和牛肉膏、蛋白胨培养基 B．固体培养基和液体培养基
C．加伊红—美蓝的培养基和含硝酸盐的培养基 D．加青霉素的培养基和无氮培养基
解析：选D 青霉素可杀死原核生物如细菌，酵母菌为真菌，因而不会被杀死。圆褐固氮菌是固氮菌，无氮源也能存活，但酵母菌无法存活，借此可分离两种微生物。
9．细菌分离与计数实验操作过程应注意( ) ①无菌操作 ②做好标记 ③规划时间 ④土样灭菌 A．①②③④ C．①②③
B．②③④ D．①②
解析：选C 由于本实验操作复杂，目的是对细菌进行分离和计数，整个过程需要无菌操作，如取土样时用到的小铁铲和盛土样的信封及容器等均需灭菌，土样称量、样品稀释及涂布平板等操作均在火焰旁进行；本实验用到的平板和试管比较多，为避免混淆，最好在使用前就做好标记；本实验耗时较长，需事先规划好时间，以便提高工作效率，在操作时更加有条不紊。
10.在涂布有大肠杆菌的培养基上进行抑菌实验，在a、b、c处分别贴浸有不同抗生素(浓度相同)的无菌滤纸片，d处滤纸片浸有无菌水。培养后的结果如图所示。以下判断错误的是( )
A．a处抑菌效果小于b处 B．b处的滤纸片没有沥干 C．c处抗生素无效 D．d为对照
解析：选A 培养皿中不同滤纸片四周透明圈的大小不同，透明圈越大，说明浸有的抗生素抑菌效果越好。a处的透明圈并不小于b处；b处不是圆形的透明圈，可能是滤纸片没有沥干，抗生素流出滤纸片；c处无透明圈，说明c处抗生素对大肠杆菌无效；d为空白对照。
11．做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是( ) A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖 B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落 D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上
解析：选D 在高压灭菌的操作过程中，加热结束后应让灭菌锅内温度自然下降，待压力表的指针指到零时，打开放气阀，旋松螺栓，打开盖子。倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全取下放到一边。接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后，再用其挑取菌落。在微生物的培养中，一般将培养皿倒置，在皿底上用记号笔做标记。
12．漆酶属于木质素降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述错误的是( )
A．生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品 B．筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落 C．在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化 D．若要长期保存菌株可采用甘油管藏的方法
解析：选A 生活污水中含木质素的物质相对较少，产漆酶菌株也较少，不宜作为分离产漆酶菌株的样品；产漆酶菌株可降解木质素，在筛选培养基中加入木质素可筛选产漆酶的菌株，筛选时可通过菌落特征挑出产漆酶的菌落；在涂布平板上生长的菌落可能还有其他杂菌，可再通过平板划线法进一步纯化；对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法，即在－20 ℃的冷冻箱中保存。
二、非选择题(共52分)
13．(16分)莠去津是一种含氮农药，在土壤中不易降解，为修复被其污染的土壤，可按下面程序选育能降解莠去津的细菌(目的菌)。请据图回答(已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明)。
(1)由图推断，从A瓶到C瓶液体培养的过程称为______________，目的是__________________________。
(2)在将C瓶菌种接种到固体培养基之前通常要进行________________，将菌种接种到固体培养基的方法有平板划线法和__________________法，从图中看本实验采用的是__________(填“前者”或“后者”)。
(3)一段时间后，培养基出现无透明圈和有透明圈两种菌落，我们筛选的目的菌是菌落中________的细菌，该菌落生长所需的氮元素主要来自__________。
(4)为弄清固体培养基中的非目的菌落来自C瓶菌种还是培养基，应如何设置对照组？__________________________________________________________________________。
解析：(1)图中从A瓶到C瓶液体培养的过程称为选择培养，目的是初步选择能降解莠去津的细菌(目的菌)并提高其密度。(2)将菌种接种到固体培养基的方法有平板划线法和稀释涂布平板法两种，由图中固体培养基上的菌落分布可知，该接种方法是稀释涂布平板法，包括梯度稀释操作和涂布平板操作。(3)根据题目信息“莠去津在水中溶解度低，含过量莠
去津的固体培养基不透明”可知，能够降解莠去津的目的菌会使菌落周围出现透明圈，因此可以选择菌落周围存在透明圈的细菌。由于培养基中只有莠去津一种氮源，因此分解莠去津的微生物所需的氮元素主要由莠去津提供。(4)为弄清固体培养基中的非目的菌落来自C瓶菌种还是培养基，应设置灭菌后不接种菌种的培养基，与实验组放在相同条件下培养，若培养基上无菌落出现，则非目的菌落一定来自C瓶菌种，若培养基上出现菌落，则说明非目的菌落可能来自培养基。
答案：(1)选择培养 初步选择能降解莠去津的细菌(目的菌)并提高其密度 (2)梯度稀释 稀释涂布平板 后者 (3)有透明圈 莠去津 (4)配制的培养基灭菌后不接种菌种，与实验组放在相同条件下培养
14．(16分)临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：
(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用______法或__________________________________法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。
(2)取该单菌落适当稀释，用________法接种于固体培养基表面，在37 ℃培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。
(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板的不同位置上，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A________；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B__________；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明________________________________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。
(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好选用抗生素________。
解析：(1)微生物的常用分离方法为划线法和稀释涂布平板法。(2)能够使菌落均匀生长、布满平板的接种方法为涂布法。(3)(4)含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A敏感；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B不敏感；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明该致病菌对C的敏感性比对A的弱；含D的滤纸片周围的透明圈比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落(排除杂菌污染)，说明该致病菌可能对抗生素D产生了抗药性。
答案：(1)划线 稀释涂布平板(或涂布) (2)涂布 (3)敏感 不敏感 该致病菌对C的敏感性比对A弱 耐药菌 (4)A
15．(20分)人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的营养价值。为了增强发酵效果，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤
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