微生物综合实验 水中细菌总数的测定
一、实验目的
1．学习水样的采集和水样中细菌总数的测定方法。 2．了解和掌握平板菌落计数的原则。 3．复习、巩固微生物实验的各单元操作。 二、实验原理
水中细菌总数的测定是进行水质检验的必要项目之一，主要作为判定饮用水、水源水、地表水等被污染程度的标志。
本试验采用平板菌落计数技术来测定水中的细菌总数。该法是根据在固体培养基上所形成的菌落来进行计数。菌落总数是指在一定条件下，1 mL水样所生长出来的细菌菌落的总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其它生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基和在一种条件下，使水中的所有细菌均能生长繁殖，因此，这种方法所得到的结果只是一种近似值。目前一般采用营养琼脂培养基，在需氧条件下，37℃培养36-48 h，所得到的细菌绝大部分是腐生性的嗜中温性需氧菌和兼性厌氧菌。
三、实验材料
1．检样：矿泉水等饮用水、河水、湖水、井水等。 2．培养基：营养琼脂培养基（附录Ⅱ-1.3）
3．仪器与其它用具：三角烧瓶，广口瓶，吸管，培养皿，试管，培养箱等。 四、实验步骤
1. 水样的采集与处理
⑴ 饮用水：采样前，先用酒精棉球擦拭瓶口灭菌，以灭菌移液管或移液枪取水样。 ⑵ 河水、湖水、池水：应取距水面10 cm~15 cm的深层水样。先将已灭菌的带玻璃塞的广口瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来使瓶口向上，拔去瓶塞，待水盛满后，将瓶塞盖好，再将瓶子从水中取出。在一定深度采水样时，需要用特制的采水器（图14-14）。采水器是一金属框，内装玻璃瓶，其底部装有重沉坠，可按需要坠入一定深度。瓶盖上系有一绳索，拉吊绳索即可打开瓶盖，待水样瓶中水盛满后，放松绳索，即自行盖上瓶盖。水样采集后，将水样瓶取出，并立即用无菌棉塞或灭菌胶塞塞好瓶口，以备检验。 水样采集后应立即检验，如需要保存或运送，应采取冰镇措施，但一般要求不得超过4 h。
图14-14 采水器
1-开瓶绳索 2-铁框 3-瓶盖 4-水样瓶 5-沉坠
2. 细菌总数的测定
⑴ 饮用水：
① 用灭菌吸管吸取0.2 mL水样，涂布于事先准备好平板中，共做2个平皿。
② 另取一空的灭菌培养皿，倾注15 mL~20 mL牛肉膏蛋白胨培养基，作为空白对照。 ③ 将平皿倒置于37℃培养箱内，培养24 h，进行菌落计数。 ⑵ 河水、湖水、池水等：
① 稀释水样：取3支装有4.5 mL无菌水的试管。取0.5mL水样注入到第一支装有4.5毫升无菌水的试管内，摇匀，再自第一管取上述稀释液0.5 mL，加入到第二支管内，如此稀释到第三管，分别制成稀释度为10-1、10-2、10-3的均匀稀释液。稀释倍数视水样污染程度而定，一般中度污染水样，取10-1、10-2、10-3三个连续稀释度，严重污染水样取10-2、10-3、10-4三个连续稀释度。
② 自最后三个稀释度的试管中各取0.2 mL稀释水，涂布于事先准备好平板中，共做2个平皿。
③待琼脂凝固后，将平皿倒置于37℃培养箱内，培养24 h，进行菌落计数。 3. 菌落计数方法：参见微生物学实验平板菌落计数部分。
五、实验结果（要求每组除自来水之外，还要选两种水源检测，共计三种） 将实验数据填入下表，并报告所检测水样的细菌总数。 1. 自来水 平板 2. 河水、湖水或池水等 稀释度 平板 菌落数 平均菌落数 计算方法 细菌总数（个/mL） 1 10-1 2 1 10-2 2 1 10-3 2 菌落数 自来水中细菌总数（个/mL） 3、对得到的菌落进行简单染色和革兰氏染色观察，画出菌体的形态图，说明革兰氏染色的结果。
水中细菌总数的测定
实验材料与设备：
1、 试剂：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、氢氧化钠、硫代硫酸钠、结晶紫、革兰氏染色
所需的试剂。 2、 器皿：500ml和250ml三角瓶、培养皿、试管、5ml和1ml移液器（吸头）、pH试纸（5-9）、
载玻片、纱布、牛皮纸、棉绳。
3、设备：灭菌锅、培养箱、摇床、超净台、显微镜、电子天平、烘箱。
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作者（小组全部成员，自己为第一作者） 前言 材料方法 实验结果 结论 参考文献 贡献率（％）：
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