川芎嗪对创伤性颅脑损伤大鼠的保护作用及机制研究
易润青① 全向阳①
【摘 要】【摘要】 目的：观察川芎嗪对创伤性颅脑损伤的保护作用及其机制。方法：选取72只雄性SD大鼠，采用PCI3000建立创伤性颅脑损伤模型，造模成功后随机分为模型组（n=15）、川芎嗪低剂量（10 mg/kg）组（n=15）、川芎嗪中剂量（20 mg/kg）组（n=15）、川芎嗪高剂量（40 mg/kg）组（n=15），同时建立假手术组（n=12）作为对照。川芎嗪三个剂量组分别尾静脉注射给予相应剂量的盐酸川芎嗪注射液，1次/d，连续7 d，模型组和假手术组给予等体积的生理盐水。给药第2、4、6、8天分别进行转棒试验和纸条粘附试验，第8天大鼠安乐死后取材进行NeuN神经元免疫组化染色和凋亡相关蛋白检测。结果：川芎嗪中、高剂量组大鼠转棒时间和纸条撕掉时间均短于模型组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；川芎嗪中、高剂量组脑梗死体积分别为（16.50±2.59）、（14.10±2.29）mm3，与模型组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。免疫组化染色发现川芎嗪高剂量组和模型组TBI大鼠损伤区周围皮层神经元细胞存活数目分别为（290.70±41.19）和（225.00±59.44）个，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；Westernblot研究可见，与模型组相比，川芎嗪高剂量组Bax蛋白表达降低、Bcl-2蛋白表达升高、Bcl-2/Bax比例升高，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：川芎嗪对创伤性颅脑损伤大鼠具有很好的保护作用，其机制可能与其抑制神经细胞凋亡保护神经细胞损伤有关。
【期刊名称】《中国医学创新》 【年(卷),期】2019(016)017
【总页数】6
【关键词】【关键词】 川芎嗪； 创伤性颅脑损伤； 氧化应激； 细胞凋亡 ①广州市医药职业学校 广东 广州 510430
创伤性颅脑损伤（traumatic brain injury，TBI）是神经外科常见疾病。全球患病人数约为3 000多万，每年死亡人数高于100万。在中国，每年约有100万TBI患者，死亡人数近十万余人。TBI治疗除了手术和常规对症治疗外，尚无有效的治疗手段。TBI发病机制主要为直接创伤性颅脑损伤和继发的氧化应激损伤、细胞钙超载、血管应激性痉挛、氨基酸兴奋性毒性等[1]，导致神经细胞死亡、神经传递功能障碍并最终引起神经功能的缺损。由于TBI发病机制复杂，单一靶点药物药效有限，而多个靶点的药物可能对TBI治疗具有很好的作用。川芎嗪（tetramethylpyrazine，TMP）是中药川芎的有效成分，其作用机制主要包括抑制钙超载、清除自由基、舒张血管、抑制细胞凋亡、改善线粒体功能、抑制细胞炎性反应等多种作用，临床上主要用于缺血性脑卒中的治疗[2]。近年来研究还发现川芎嗪还可以缓解蛛网膜下腔出血血管痉挛[3]，提示川芎嗪有可能对TBI具有很好的治疗作用。然而目前尚未见川芎嗪对创伤性颅脑损伤的治疗作用的研究报道，本研究旨在探讨川芎嗪治疗TBI的作用及其机制，为临床应用提供实验依据。现将研究结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验药物与主要试剂 盐酸川芎嗪注射液（生产厂家：郑州卓峰制药有限公司，批准文号：国药准字 H20055479，规格：2 mL∶40 mg）；0.9% 氯化钠注射液（生产厂家：山东齐都药业有限公司）；Neu一抗购于Millipore公司；GFAP一抗、Bcl-2一抗、Bax一抗、Caspase-3一抗购于CST公司、
GTVisionTM免疫组化检测试剂盒购于上海基因科技有限公司。
1.2 仪器设备 PCI-3000颅脑损伤仪（Hatteras）；异氟烷麻醉系统（深圳市瑞沃德生命科技有限公司）；PL3001天平（梅特勒-特利多）；大鼠转棒仪（淮北正华生物仪器设备有限公司）；164-5050电泳仪（Bio-Rad）；IS4000MM蛋白凝胶成像系统（Carestream）。
1.3 实验动物 雄性SD大鼠72只，体重300～350 g，购于广东省医学实验动物中心，生产许可证号：SCXK（粤）2013-0002。大鼠饲养于SPF级实验动物中心，正常饲养。 1.4 实验方法
1.4.1 TBI模型建立 SD大鼠造模前禁食不禁水至少10 h，采用异氟烷麻醉后规定到大鼠立体定位仪上，以大鼠前囟后右侧旁开2 mm为起点，在前囟与后囟之间开约25 mm2骨窗。采用PCI3000颅脑损伤仪造模，选择直径为5 mm撞针，撞击参数按照文献[4]设定为速度1.5 m/s、深度5 mm、停留时间120 ms。假手术组仅开颅不采用颅脑损伤仪造模。术后缝合切口、碘伏消毒后放回SPF动物中心继续正常饲养。
1.4.2 大鼠分组与给药 大鼠TBI造模后随机分为4组，模型组、川芎嗪低剂量（10 mg/kg）组、中剂量（20 mg/kg）组、高剂量（40 mg/kg）组，同时采用假手术大鼠作为对照（给予0.9%氯化钠注射液），其中假手术组12只大鼠，其余每组15只大鼠。大鼠按照每组平均体重计算给药量，每组大鼠按照川芎嗪低剂量组给药体积调整每组的给药体积，保证每只大鼠给药体积相当。TBI大鼠造模后当日立即尾静脉注射给药1次，之后每日早上给药一次，连续给药7 d。
川芎嗪对创伤性颅脑损伤大鼠的保护作用及机制研究
