反相高效液相色谱法分离分析奥美拉唑及其相关组分
刘静，关瑾，石爽，阎峰
【摘 要】建立奥美拉唑及其两种相关组分的反相高效液相色谱分离分析方法。考察了缓冲盐的种类、浓度和pH等色谱条件对分离分析的影响。以乙腈-15 mmol﹒L-1磷酸二氢钠（pH 7.0）为流动相，在C18色谱柱上，采用梯度洗脱，对奥美拉唑及两种相关组分进行分离分析。在优化色谱条件下，奥美拉唑及两种相关组分在10 min内达到基线分离；奥美拉唑、2-巯基-5甲氧基-1H-苯并咪唑（杂质A）和奥美拉唑硫醚（杂质B）在各自测定的质量浓度范围内与峰面积的线性关系良好（r2≥0.9960）, 检出限（信噪比为3）分别为15 ng﹒mL-1、15 ng﹒mL-1和30 ng﹒mL-1；样品的回收率为98.4%~102.0%，相对标准偏差为0.62%~0.82%。该方法操作简单、快速、准确可靠，并用于实际样品的分析，获得了令人满意的结果。 【期刊名称】辽宁化工 【年(卷),期】2017(046)012 【总页数】3
【关键词】关 键 词：奥美拉唑；反相高效液相色谱法；分离分析
奥美拉唑为世界上第一个质子泵抑制剂药物，用于治疗消化性溃疡[1-2]。该药能选择性地抑制胃壁细胞的 H+/K+-ATP酶，从而抑制胃酸的分泌，具有疗效高、耐受性好等优点[3-4]。2-巯基-5-甲氧基-1H-苯并咪唑（杂质A）和奥美拉唑硫醚（杂质B）为奥美拉唑的合成原料和中间体[5]。目前文献报道的奥美拉唑的分析方法主要有紫外分光光度计法[6]、高效液相色谱法[7-10]、近红外光谱法[11]和气相色谱法[12]。本文采用反相高效液相色谱法同时分离分析奥
美拉唑、杂质A和杂质B，并进行了方法学验证。该方法操作简单、快速、准确可靠，可用于奥美拉唑的质量控制。
1 仪器与材料
Agilent 1260高效液相色谱仪（包括DAD检测、化学工作站，美国安捷伦公司）。奥美拉唑（含量质量分数0.62%≥98.0%）、2-巯基-5甲氧基-1H-苯并咪唑（含量质量分数≥99.0%），奥美拉唑硫醚（含量质量分数≥99.0%）对照品（HPLC面积归一化法测定其含量质量分数），奥美拉唑原料药由沈阳化工大学精细化工实验室制备；乙腈（色谱纯）和其他试剂（分析纯）（天津市大茂化学试剂厂)；水为二次重蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS2-C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-15 mmol﹒L-1磷酸二氢钠(B)(pH 7.0)；梯度洗脱程序: 0~7min: 35% A~60% A,7~10 min: 60% A~35% A,10~15 min: 35% A；流速：1 mL﹒min-1；检测波长: 302 nm；柱温：30 ℃；进样量：20 μL。 2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品储备溶液的配制
精密称取奥美拉唑、杂质A、杂质B对照品各20 mg置10 mL容量瓶中，用甲醇将其溶解、定容、摇匀，制得浓度为2 mg﹒mL-1的标准储备液。 2.2.2 供试品溶液的配制
精密量取奥美拉唑、杂质A和杂质B标准储备液适量，制得奥美拉唑和杂质B浓度均为50 μg﹒mL-1、杂质A浓度为15 μg﹒mL-1的混合供试品溶液。
2.3 色谱条件的优化与系统适用性试验
实验考察了乙腈、甲醇对奥美拉唑、杂质A和杂质B分离分析的影响，乙腈表现出最佳分离效果。由于3个组分的极性相差较大，采用等度洗脱程序分离分析时间长，本实验采取梯度洗脱程序。
实验考察了流动相中乙酸盐和磷酸盐溶液对分离分析的影响，磷酸盐体的分离系更稳定。实验进一步考察了磷酸盐浓度和pH对分离分析的影响，比较磷酸盐浓度为10、15、20、25、30 mmol﹒L-1时对分离分析的影响，磷酸盐浓度为15 mmol﹒L-1时，分离效果最好。实验考察磷酸盐溶液的pH对分离的影响，由图1可见，随着pH增大，分离度增大，但是保留时间延长。综合考虑分离度和分析时间，选择pH为7。
以乙腈-15 mmol﹒L-1磷酸二氢钠(pH 7.0)为流动相，在C18色谱柱上，采用梯度洗脱，奥美拉唑、杂质A和杂质B的分离色谱图见图2，各色谱峰分离度均大于3，理论塔板数不小于5 000。 2.4 方法学考察
2.4.1 方法的线性范围、检测限和定量限
配制奥美拉唑系列标准溶液，浓度范围为1 ~ 1 200 μg﹒mL-1；杂质A系列标准溶液，浓度范围为0.05~1 μg﹒mL-1；杂质B系列标准溶液，浓度范围为0.12~2.4 μg﹒mL-1。以目标分析物峰面积为纵坐标(y)、质量浓度为横坐标(x,μg﹒mL-1)绘制标准曲线，其线性范围、回归方程和相关系数(r2) 见表1。r2均大于0.996 0，表明奥美拉唑、杂质A和杂质B在各自的线性范围内呈良好的线性关系。分别以3倍和10倍信噪比(S/N)确定方法的检测限和定量限，奥美拉唑、杂质A和杂质B的检测限分别为15、15、30 ng﹒mL-1，定量限
反相高效液相色谱法分离分析奥美拉唑及其相关组分
