去背景后荧光图像：
四、标尺添加：
点击标尺按钮添加标尺，可在属性界面改变标尺参数。注意此时添加的标尺并未与荧光图像合并在一起，可点击下拉菜单中的[Burn]选项使两者合并，但会降低图像分辨率。推荐做法为，添加标尺后，键入[Shift+Z]得到添加了标尺的截图。
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五、一维荧光亮度分布：
1、点击荧光空间分布检测按钮，出现蓝色箭头，拖曳调整箭头确定需要分析的一维区域。
2、点击主界面工具栏中荧光强度分布检测按钮（Intensity Profile），打开[Intensity Profile]界面，得到荧光强度分布曲线。
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六、长度面积等常规测量
七、细胞计数
NIS-Element程序设计了多种方法来细胞计数及分析每个细胞的面积，平均亮度等信息。每种方法都有优势和缺点，功能也有一定程度重叠。实际使用中应根据实际情况和使用者自己的习惯灵活组合得到正确可靠的分析结果。
细胞较少时，可用ROI绘图工具选择细胞，在[ROI Statistics]界面得到细胞信息； 需要处理大量细胞时（>100个），ROI分析方法便显得相对繁琐。我们可以采用下面三种方法进行快速的细胞计数。
1、[Object Count]计数：最直接的细胞计数方法。原理为细胞的荧光亮度高于周围背景，且每个细胞有清晰的边界，因此可以通过设置荧光亮度阈值选择细胞进行计数和分析。
（1）[Object Count]界面简介：
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名称 1 阈值设置功能区（Threshold） 功能 MCH/ Intensity 阈值设定 MCH状态下可用，横坐标表示荧光亮度，纵坐标表示像素点数量。拖曳图中的两条直线设置荧光亮度阈设定像素点荧光亮度/强度阈值作为识别细胞的标准 29
值范围。相应的在图像中，亮度阈值范围内的像素点会在被选中，程序会根据亮度在空间上的连续程度自动识别细胞，上图绿色框表示已选中的细胞。此过程中亮度阈值的选择非常关键。 荧光通道选择 MCH状态下可用，在下拉菜单中选择需要设置阈值的荧光通道 以一定面积区域作为探测图像荧光亮度/强度的单 位。单位大小越小，探测精度越高，细胞选择越准确。 清除图像中的细胞选择框 [Clear] 图像中未选中区域会用蓝色框表示，升高[Clear]数值，可清除蓝色框，使画面清爽 [Smooth] [Separate] 使图像中的选择框圆润 图像中如有相邻很近的细胞，程序可能会将其误误处理为一个细胞，升高[Separate]将提高程序分隔细胞的能力，但也会造成将一个细胞误处理为两个或多个细胞的后果 2 限制条件功能区通过阈值设置在图中选择细胞，由于程序是通过亮度进行识别，因（Restractions） 此对与细胞同等亮度的杂质等也会一并选择计入细胞内；有时在选中的细胞中需要剔除一些面积太小的细胞。遇到这样的情况，可以在[Restractions]功能区选择面积（Area）或长度（Length）阈30
激光共聚焦显微镜操作手册最终版
