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激光共聚焦显微镜操作手册最终版 - 图文

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数据分析

一、ROI区域分析

当需要在图像中选取特定区域进行荧光分析时,可通过ROI绘图工具实现。

1、点击ROI绘图工具按钮,在下拉菜单中选择区域形状,其中[Auto Detect ROI]表示系统自动识别形状,在选择细胞时非常有用,原理是基于相同荧光亮度轮廓的检测。

2、ROI图型绘制后,鼠标右击表示确定,ROI区域会出项数字图标表示选定。白色ROI区域为当前活动ROI。下图中ROI 4区域即为[Auto Detect ROI]绘图工具绘制。

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3、[ROI Statistics]界面:右击主界面空白处,在[Analysis Controls]选项中打开[ROI Statistics]界面,界面显示当前活动ROI区域的各种参数,如平均亮度,总面积等。

4、[Automated Measurement Results]界面:点击主界面工具栏图标,打开[Automated Measurement Results]界面,选择[ROI Data],界面图表中显示所有ROI区域的数据信息,可点击[Options]按钮添加或删除显示信息类型;界面右侧直方图显示感兴趣数据信息(下拉菜单中选择)的区域数量分布。

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二、LUTs调节图像荧光亮度

图像中每个像素点的荧光亮度数值范围为0-4095。如某个像素点的真实荧光亮度大于4095,属于曝光过度,图像中实际显示荧光亮度只能达到4095,有时会影响实验结果,如图像中曝光过度的像素点过多,应调节扫描参数降低荧光亮度。可通过LUTs界面的曝光过度/不足指示功能来判断图像是否曝光过度。LUTs界面还可以对荧光图像的亮度进行调节,去除图像噪音,增加图像亮度。 [LUT]界面简介:

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名称 1 2 调节通道选择 曝光不足/过度显示 功能 在下拉菜单中选择需处理的荧光图像通道 可在下拉菜单中选择图像中荧光亮度不足/过度区域的指示色彩,点击按钮功能开启 3 荧光亮度起始阈值 图像中所有荧光亮度数值比起始阈值小的像素点,亮度数值全部强制为0。用于去除较弱荧光的像素点,去除背景,使画质清晰。效果见下图。 4 5 6 荧光亮度起始阈值设置 荧光亮度结束阈值设置 荧光亮度结束阈值 拖曳箭头设置起始阈值 拖延箭头设置结束阈值 图像中所有荧光亮度数值比结束阈值大的像素点,亮度数值全部强制为4095。可极大提高图像亮度,不当使用会淹没真实数据信息。效果见下图。 原始荧光图像:

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通过LUT调节图像荧光强度:

三、去背景

荧光图像的背景过重会影响图片质量。在Live状态下,可通过调节[Acquisition]功能区的[offset]补偿功能去除背景。在已拍摄好的荧光图像上,也可实现去背景的操作。 (1)点击背景ROI(Background ROI)按钮,选定背景ROI区域。

(2)系统自动计算背景ROI区域平均荧光亮度,并将此数值设置为荧光亮度起始阈值。 (3)点击[Background ROI]按钮下拉菜单中的[Subtract Background Using Background ROI],去背景操作完成。 去背景前荧光图像:

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激光共聚焦显微镜操作手册最终版 - 图文

数据分析一、ROI区域分析当需要在图像中选取特定区域进行荧光分析时,可通过ROI绘图工具实现。1、点击ROI绘图工具按钮,在下拉菜单中选择区域形状,其中[AutoDetectROI]表示系统自动识别形状,在选择细胞时非常有用,原理是基于相同荧光亮度轮廓的检测。2、ROI图型绘制后,鼠
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