6、点击[OK]按钮回到[A1 Setting]界面，由于[Setting]界面中光路设置的调整，[Filter and Dye]和[Acqusition]功能区会做出相应的改变。下图为标准探测模式（DU4）的通道界面。
[Filter and Dye]功能区简介：
名称 1 探测器显示(Detector) 2 扫描序列 （Ch series） None模式：多种激光同时扫描，各个通道同时接收发射光，容易发生“串色”现象，推荐只在使用一种激光时使用。 Line模式：激光按顺序依次扫描样品，一种激光进行扫描时，只有相对应的通道接收发射光，有效避免串色现象。 3 4 5 设置按钮 状态 透射探测器 设置光路 光路状态的直接体现，包括极光类型，通道类型和荧光染料名称 显示透射激光探测器处于“ON”或“OFF”状态。 功能 当前使用的探测器类型及对应的荧光染料和激发光类型等 串色现象解释及Line模式图解：
串色：目前的光路设置为一个激光激发样品产生的发射光只对应一个接收通道，则当同时有两种及以上激光激发样品时，如一种或多种激光激发的发射光在多个通道均可检测到，将导致测试结果的不正确。
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Line模式图解：
一个方格为一个像素点，一行为扫描的一条线。
7、在[A1 Setting]界面的[scan setting]功能区设置扫描参数，扫描参数在扫描过程中也应根据情况进行调整。
[scan setting]功能区简介：
名称 1 2 扫描方向 扫描大小 功能 控制扫描头扫描方向单向或是双向。 即图像分辨率。实际上为像素点多少的选择，范围从512-4096。如512表示X方向扫描一条有512个像素点的线，Y方向共扫描512条线。图像的像素点越多，在相同扫描速度下平均每个像素点上的曝光时间越短，如像素点从512增加到1024，图像亮度降低4倍。要提高亮度，必须提高扫描速度，或调节激光强度和增益。 7
3 扫描速度 范围从1-1/64，1表示1秒钟完成1张图像的扫描，1/2表示2秒钟完成1张图的扫描，其他数值以此类推。扫描速度的选择范围会随像素点多少的改变而改变。其他扫描条件相同的情况下，扫描速度越慢，平均每个像素点上的曝光时间越长，亮度越高，同时一幅图像的完成时间也越长。 4 Line skipping 可选择数值2,4,8,16。比如：选择2时，扫描第一条线后，跳过第二条线，直接进行第三条线扫描。可提高扫描速度，但不改变分辨率。 5 平均或积分模式 平均模式：可选择数值2,4,8,16等。同时扫描/拍摄所选择数值张数的图像，多张图像合并后进行亮度平均，可降低随机信号，减少噪音。 积分模式：可选择数值2,4,8,16等。同时扫描/拍摄所选择数值张数的图像，多张图像合并后进行亮度积分。 6 放大倍数 改变图像放大倍数，与Scan Area（见下文）放大倍数同步。 三、获得图像
8、点击[Acquire]功能区[Live]按钮，开始扫描，主界面出现扫描图像[Live]视窗，视窗中功能键介绍见数据分析章节。
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鼠标滚轮前后滑动，调整焦距以找到荧光强度最大的焦平面，得到亮度最高的扫描图像。
图像在标准探测模式（DU4）下获得，注意下方通道标签和[Filter and Dye]功能区探测器类型和色彩的一一对应关系。[All]标签页为所有通道图像全部叠加到一起后的图像；色彩标签页为所对应探测器通道的图像。
[TD]标签页为激光明场图像；[Custom]标签为自定义标签，鼠标右击custom标签，点击属性，可选择两个或几个所需要通道进行叠加得到所需要的图像；右击色彩通道标签，选择属性，还可改变通道色彩。
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9、扫描图像亮度调节。
荧光亮度应处在一个合适的范围，既不能太低使画面显得模糊，也不能太高使画面曝光过度，同时希望背景干净，随机噪声少；因此需要对图像的荧光亮度进行调整。在Live状态下，[Acquisition]功能区通过调整PMT探测器增益（HV）,激光发射功率（Laser）和针孔（pinhole）大小改变扫描图像亮度。 [scan setting]功能区也应配合调节，但必须在Frozen状态下进行，否则会对扫描头造成严重损害！
[Acquisition]功能区简介：
名称 1 增益（HV） 功能 调节PMT探测器阈值， 512像素点条件下，数值在80-120之间比较合适，超过120导致背景噪音过大，图像失真。随像素点增加，数值可适当加大。 2 激光输出功率 （Laser） 数值表示激光总功率的百分比。激光越强，越容易引起荧光染料的淬灭和细胞的死亡。一般数值在5-10之间，若图像荧光强度太小，也可适当加大强度。 3 补偿（offset） 通常用于去背景，数值越小，背景越干净，一般数值为0。 10
激光共聚焦显微镜操作手册最终版 - 图文
