亲和色谱
分配系数：（名词解释） m ? c s c m，cs和cm分别为组份在固定相和流动相中的浓度。 保留时间：（名词解释）
试样从进样到柱后出现峰极大点时所经历的时间。可用时间/ 距离/体积单位表示。 保留体积：（名词解释）
指从进样开始到被测组份在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相体积。 柱效与流动相关系 柱层析三种方法
凝胶过滤层析分配系数、
凝胶过滤分配系数、洗脱次数和相对分子量的关系：
凝胶过滤色谱操作中溶质的分配系数m只是相对分子质量、分子形状和凝胶结构（孔径分布）的函数，与所用洗脱液的pH值和离子强度等无关。
蛋白质在凝胶介质中的分配系数随相对分子质量的增大而减小。 排阻极限：指不能扩散到凝胶网络内部的最小分子的相对分子质量。 溶胀率：溶胀后每克干凝胶所吸收的水分的百分数。 床体积：1 g干燥凝胶溶胀后的体积。 凝胶过滤色谱：
原理：是利用凝胶过滤介质为固定相，根据料液中溶质相对分子质量的差别进行分离的液相色谱法。
应用： 分离纯化、脱盐、相对分子质量的测定 洗脱方法：恒洗脱液洗脱 离子交换色谱：
原理：是以离子交换剂为固定相，根据荷电溶质与离子交换剂之间静电相互作用力的差别进行溶质分离的洗脱色谱法。
应用 ：分离纯化生物产物
洗脱方法：线性梯度洗脱法 或 逐次洗脱法。 反相色谱：（概念）
反向色谱（RPC）利用表面非极性的反相介质为固定相，极性有机溶剂的水溶液为流动相，是根据溶质极性（疏水性）的差别进行分离纯化的洗脱色谱法。 流通色谱：（概念）（灌注色谱）
指利用含有大穿透孔的介质为固定相的液相色谱法，其分离模式包括前述的各种吸附色谱。
羟基磷灰石色谱吸附和洗脱的原理：
吸附原理：羟基磷灰石色谱(HAP)的吸附主要基于钙离子和磷酸根离子的静电引力，即在HAP晶体表面存在两种不同的吸附晶面，各存在吸附点C和P，分别起阴、阳离子交换作用。
洗脱原理：HAP色谱通常以磷酸盐缓冲液为流动相，采用提高盐浓度的线性梯度脱法 问：利用疏水性色谱分离A和B的混合物时，在某操作条件下两者分离度不理想，试述如何改善条件，提高分离度，说明理由。
（1）降低盐浓度：疏水色谱中加入盐有利于蛋白质的吸附，盐浓度越高，吸附容量越大。
（2）加入添加剂（如乙二醇等）：低浓度的添加剂有利于降低蛋白质与配基之间的疏水作用力
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（3）降低盐浓度和添加剂同时使用
（4）降低洗脱操作温度或降低洗脱液的PH值：温度升高，疏水作用增强，蛋白质的保留值增加。无论PH比pI大或小，都会使蛋白质带上电荷，此时如填料的配基不带电荷，蛋白质易于洗脱。 {老师提的几点：（1）换填料（2）增加柱高（3）降低流速（4）降低进料量}
第八章
生物亲和作用的概念和本质：
概念：生物物质，特别是酶和抗体等蛋白质，具有识别特定物质并与该物质的分子相结合的能力。这种识别并结合的能力具有排他性。生物分子间的这种特异性相互作用称为生物亲和作用。
本质：具有亲和作用的分子对之间具有“钥匙”和“锁孔” 的空间结构关系。 亲和结合作用，还需存在特殊的相互作用力：静电作用、氢键、疏水相互作用、配位键、弱共价键
亲和色谱原理和操作：
原理：亲和吸附是利用亲和吸附作用分离纯化生物物质的液相色谱法。
操作：与一般的固定床吸附操作相似，分进料、杂质清洗、目标产物洗脱和色谱柱再生4个步骤。
亲和色谱填料的制备过程：一般包括载体的选择、载体的活化和配基的连接。 特异性和非特异性洗脱的特点：
特异性洗脱利用含有与亲和配基或目标产物具有亲和结合作用的小分子化合物溶液为洗脱剂，通过与亲和配基或目标产物的竞争性结合，脱附目标产物。
例如：Lys和Arg均为t-PA的抑制剂，利用固定化Lys为配基亲和分离t-PA时，可用Arg溶液进行洗脱。
优点：洗脱条件温和，有利于保护产物的生物活性；由于仅特异性洗脱目标产物，对于特异性较低的亲和体系或非特异性吸附较严重的物系，有利于提高目标产物的纯度。
非特异性洗脱通过调节洗脱液的pH值、离子强度、离子种类或温度等理化性质降低目标产物的亲和吸附作用，是使用较多的洗脱方法。
第九章
等电点聚焦的概念和原理：
原理：等电点聚焦利用蛋白质和氨基酸等两性电解质具有等电点，在等电点的pH值下呈电中性，不发生泳动的特点进行电泳分离。 双向电泳的概念和原理：
概念：双向电泳同时利用分子尺寸和等电点这两种性质的差别进行蛋白质等生物大分子的分离，即将普通凝胶电泳和等电点聚焦相结合，使溶质在二维平面上得到分离。 原理：如图：在凝胶电泳槽的y方向上凝胶具有逐渐增大的浓度分布， x方向上具有pH梯度。
? x方向上电泳，使溶质分子以等电点聚焦的形式泳动到其等电点处。
? 然后将适当pH值的缓冲液渗透到凝胶中，在y方向上加电场使溶质再次泳动。此时溶
质之间的泳动速度受荷电量及相对分子质量的影响，相互之间得到进一步的分离。 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳概念及其分离的原理：
凝胶层由浓度不同的两层凝胶组成：浓缩胶(溶质在此层得到浓缩)和分离胶(各个组分根据迁移率的差别分离)。 不连续性表现在：
1） 凝胶孔径不连续性：
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2） 缓冲体系离子组成及pH值的不连续性： 3） 电位梯度的不连续性：
在这样一个不连续的系统里，存在三种物理效应，即样品的浓缩效应，凝胶的分子筛效应和电荷效应，由于这三种物理效应，使样品分离。
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生物分离工程知识点整理共8页
