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兽医（小动物）传染病学实验内容
实验一 消毒
一、目的
1.掌握消毒的方法
2.了解常用化学消毒药及其使用方法 3.掌握检查消毒质量的方法 二、消毒的种类和方法 消毒的种类：
1.预防性消毒：结合平时的饲养管理对畜舍、场地、用具和饮水等进行定期消毒，以达到预防一般传染病的目的。 2.随时消毒（应急消毒）：在发生传染病时，为了及时消灭刚从病畜体内排出的病原体而进行的临时性的消毒。
3.终末消毒：在病畜解除隔离、痊愈或死亡后，或者在疫区解除封锁之前，为了消灭疫区内可能残留的病原体所进行的全面彻底的大消毒。 消毒的方法：
1.机械性清除：用清扫、洗刷、通风等机械性的方法清除存在于环境中的病原体。 2.物理学消毒：用物理学方法杀灭环境中的病原体。 阳光
高温：火焰烧烤、煮沸消毒、蒸气消毒
3.化学消毒：利用化学药物杀灭病原微生物。
4.生物热消毒：这是消毒粪便常用的消毒方法。在粪便的堆沤过程中，利用粪便中的微生物发酵产热，可以使温度高达70℃以上，经过一段时间（1～3个月），可杀死细菌、病毒、寄生虫卵等而达到消毒的目的。 三、化学消毒剂的分类
根据化学结构和作用不同可分为 1.碱类 6.醛类
2.酸类 7.表面活性剂 3. 酚类 8.醇类 4.氧化剂 9.重金属类 5.卤素类 10.染料类 畜舍常用消毒药的特点与选用
1．氢氧化钠 对病毒和细菌有较强的杀灭作用，2%－3％的热水溶液喷雾消毒，用于被病毒或细菌污染的畜舍、场地和食具等。4％－5％的热水溶液对芽胞杆菌亦有很强的杀灭力。氢氧化钠对金属制品有腐蚀性，消毒完毕要立即用水洗干净；对皮肤、被毛和粘膜亦有腐蚀作用，因此，消毒畜舍及食具时，应移出动物，隔天用水冲洗场地及食具后，方能让其入内。 2．石灰乳 石灰乳是由生石灰1份加水1份制成熟石灰，然后用水配成 10％－20％的混悬液。本品有效强的杀灭病毒和细菌的作用，但对芽孢无效，可用于畜舍地面、墙壁及畜栏等处消毒。由于熟石灰可丛空气中吸收二氧化碳而变成无消毒作用的碳酸钙，故石灰乳应现配现用。
3．漂白粉 是最常用的一种含氯消毒化合物。新制漂白粉含有效氯25%-36%，受潮或久贮渐分解无效，当有效氯含量低于16％时，则不宜作消毒使用，故使用前应测量其有效氯含量。常用于食具、畜舍、地面、水井以及呕吐物和排泄物等的消毒。
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4、福尔马林 为含甲醛40％的水溶液，有强大的杀菌和杀病毒作用，常用2%-5%福尔马林液喷洒消毒畜舍的地面、墙壁、食具以及排泄物和呕吐物等，因本品有特殊气味，常影响猫的食欲，故猫舍及食具多不使用。
5、过氧乙酸 使用时应现配现用，过氧乙酸对病原微生物有强而快速的杀灭作用，不仅能杀死细菌、真菌和病毒，而且能杀死芽胞，常用0.5%溶液喷雾消毒畜舍地、墙壁、食具及周围环境等，用1％溶液作呕吐物和排泄物的消毒，用0.2％－0.4%溶液作蔬菜、饲草的浸泡消毒，本品对金属和橡胶制品有腐蚀性，对皮肤有刺激性，使用时应当多加注意。 四、畜舍的消毒 1.预防性消毒
先清扫→化学消毒剂消毒 2.随时消毒
在疫情期间带动物消毒。选用高效、低毒、对畜禽刺激小的消毒药。 3.终末消毒
先用消毒剂消毒→清扫 五、消毒质量的检查 1.清洁度的检查
2.消毒药检查正确性的检查 3.使用浓度和数量的检查 4.细菌学检查
细菌学检查的方法和步骤
⑴．选取一块合适的地点，画出10cm×10cm的3个紧挨着的方格，命名为A地、B地和C地。
⑵．将桌上9个小青瓶依次用记号笔标上号码：A1、A2、A3、B1、B2、B3和C1、C2、C3。用移液器分别注入灭菌生理盐水5mL、4.5mL 、 4.5mL、5mL、4.5mL、4.5mL和5mL、4.5mL、4.5mL 。
⑶．用棉花签蘸取灭菌小青瓶A1号内少许灭菌生理盐水，然后均匀涂抹A地，理论上将A地所有的细菌移到A1号的5mL生理盐水内。
⑷．用两种消毒液分别喷洒B地和C地，等半小时自然晾干。
⑸．用移液器从A1号小青瓶内吸取0.5mL液体移到A2瓶内，吹打均匀；然后再用移液器从A2号小青瓶内吸取0.5mL液体移到A3瓶内，吹打均匀。
⑹．用移液器从A3号小青瓶内吸取生理盐水0.2mL移到灭菌固体普通培养基内中央，然后用已在酒精灯外焰上烧过的玻璃涂抹棒将此0.2mL液体均匀涂抹在培养基整个平面上。平板标记上班级、组号和日期后置于37℃培养过夜。
⑺．半小时已过。用灭菌棉签蘸取灭菌小青瓶B1(C1）号内少许灭菌生理盐水，然后均匀涂抹B（C）地，理论上将B（C）地所有的细菌移到B1（C1）号的5mL生理盐水内。
⑻．用移液器从B1（C1）号小青瓶内吸取0.5mL液体移到B2（C2）瓶内，吹打均匀；然后再用移液器从B2（C2）号小青瓶内吸取0.5mL液体移到B3（C3）瓶内，吹打均匀。
⑼．用移液器从B3（C3）号小青瓶内吸取生理盐水0.2mL移到另一块灭菌固体普通培养基内中央，然后用已在酒精灯外焰上烧过的玻璃涂抹棒将此0.2mL液体均匀涂抹在培养基整个平面上。平板标记上班级、组号和日期后置于37℃培养过夜。
⑽ ．第2天从恒温箱中取出平板，计算长出的细菌个数，再计算出甲地和乙地的原细菌个数。
实验二 免疫接种技术
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实验目的
1．掌握免疫接种的方法与步骤。
2.熟悉兽医生物制品的保存、运送和用前检查方法。
实验概述
疫苗免疫接种的途径是根据病原体侵入门户、在机体内的定居场所、疫苗菌（毒）株的活性、佐剂及其使用等特点，经过动物免疫学试验确定的。不同疫苗的接种途径不完全相同，合理选择免疫途径不仅能充分发挥全身性体液免疫和细胞免疫应答的能力，同时也能大大提高机体局部的免疫应答。在实践中，应严格按照商品疫苗的使用说明和预先制订的免疫程序进行，不能随意更换免疫接种途径。对于特定疫苗具有多种可选择的接种方法时，选择的接种方法则要根据动物群状态、当地疾病流行形式以及养殖场内部可用资源情况等确定。每种接种方法都具有自身固有的优缺点，生产中可以根据情况灵活选用。
实验材料和仪器
酒精棉球、碘酒、注射器、针头、气雾发生器
实验操作步骤和方法
一、免疫按种的方法
免疫接种的方法很多，主要有注射免疫法、经口免疫法，气雾免疫法等数种。注射免疫法中又可分为皮下接种、皮内接种、肌肉接种及静脉接种等四种。
1．皮下接种法：马、牛等大动物皮下接种一般采用颈侧部；猪在耳根后方；家禽在胸部、大腿内侧。根据药液浓度和动物大小，一般用16—20号针头，长约1.2—2.5cm。但家禽则应采用针孔直径小于20号的针头。
皮下接种优点是操作简单、剂量分布均匀、吸收较皮内接种为快；缺点是剂量大，群体免疫时费时、费力。且疫苗皮下接种的反应较皮内大。大部分常用的疫苗和免疫血清，一般均采用皮下接种。
2．皮内接种法：马皮内接种采用颈侧、眼睑部位；牛、羊除颈侧外，可在尾根或肩胛中央部位；猪大多在耳根后；鸡在肉髯部位。
现用兽医生物制品用仅有羊痘弱毒菌苗作皮内接种，但诊断液皮内接种的应用较多。皮内注射一般用专门注射器，容量2-l0ml，针孔直径19—25号；也可使用蓝心注射器，容量lml和相应的注射针头。
皮内接种的优点是使用药液少，同样的疫苗皮内注射较之于皮下注射反应小。同时，真皮层的组织比较致密，神经末梢分布广泛，特别是猪的耳根皮内比其他部位容易保持清洁。同量药液皮内注射时所产生的免疫力较皮下注射为高。皮内接种的缺点是手续比较麻烦。
3．肌肉接种法：马、牛、猪、羊肌肉接种，一律采用臀部或颈部；鸡可在胸肌部接种。
现有兽医生物制品，除猪瘟弱毒疫苗、牛肺疫弱毒疫苗和多种灭活疫苗以及在某些情况下接种血清可以采用肌肉接种外，其他生物制品一般都不应用此法进行接种。一般使用16—20号针头，长约2.5—3.7cm。
肌肉接种优点是药液吸收快、免疫效果缺失可靠、注射方法也较简便；缺点是群体免疫费时、费力，接种部位不当易引起跛行。
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4．静脉接种法：马、牛、羊静脉接种一般在颈静脉部位；猪在耳静脉部位；鸡则在翼下静脉部位。
现用兽医生物制品中的免疫血清，除了皮下或肌肉接种外，亦可采用静脉接种，尤其对急于传染病患畜治疗时。疫苗、菌苗、诊断液一般不作静脉注射。
静脉接种优点是应用剂量大、奏效快速，可以及时抢救患病动物。缺点是手续比较麻烦，如用异种动物血清可能引起过敏反应。
5．经口免疫法：分饮水免疫和喂食免疫两种，前者是将可供口服的疫（菌）苗混于中，动物通过饮水而获得免疫，后者是将可供口服的疫（菌）苗用冷的清水稀释后拌入饲料，动物通过吃食而获得免疫。经口免疫时，应按动物头数和每头动物平均饮水量或吃食量，准确计算需用的疫（菌）苗剂量。
免疫前一般需要停饮或停喂半天，以保证饮喂疫（菌）苗时每头动物都能饮用一定量的水或吃入一定量的料。应用冷清水稀释疫（菌）苗，混有疫（菌）苗的饮水和饲料也要注意掌握温度，一般以不超过室温为宜。已经稀释的疫（菌）苗应尽快饮喂。此法可用于猪肺疫弱毒菌苗和鸡新城疫弱毒菌苗等免疫接种。
本法具有省时、省力的优点，适于大群动物免疫；缺点是由于动物饮水量或吃食量不同，每头动物体内摄入的疫（菌）苗量有差异，因而容易出现群体免疫不均匀现象，不适合初次免疫。
6．气雾免疫法：此法是通过压缩空气借助于气雾发生器将稀释疫（菌）苗喷射出去，使疫（菌）苗形成直径1－l0μm的雾化粒子均匀地浮游在空气之中，动物将雾化粒子吸入肺内刺激产生的免疫。
气雾免疫装置由气雾发生器（即喷头）及动力机械组成。压缩空气的动力机械，可因地制宜，利用各种气泵或用电动机、柴抽机带动空气压缩泵。 雾化粒子大小是影响免疫效果的最重要因素，大小为1－l0μm的粒子为有效粒子，气雾发生器能产生70％以上有效粒子时为合格。测定雾化粒子大小时，用一拭好的玻璃，周围涂以凡士林油，在玻板中央滴一小滴机油，用拇指和食指转动玻片使其均匀分布。将玻片在距离喷头10－30cm处迅速通过而使雾化粒子吹于机油面上，然后将玻片液面朝下放于凹玻片上，在显微镜下观察，移动视野，用目测微尺测量其大小，并计算其有效粒子的比率。每使用气雾发生器时最好进行粒子大小测定，合格后方能使用。 （1） 室内气雾免疫法：此法需有一定的房舍设备。免疫时菌苗用量主要根据房舍大小而定，可按下式计算：
菌苗用量=D×A/T×V
式中： D——计划免疫剂量；
A——免疫室容积（L）； T——免疫时间（分钟）；
V——呼吸常数，即动物每分钟吸入的空气量（L）。 菌苗用量计算完毕后，将动物赶入室内，关闭门窗。将喷头由门窗缝伸入室内，使喷头保持与动物头部同高，向室内四面均匀喷射，完毕后让动物在室内停留20－30分钟。
操作人员要注意防护，戴上大而厚的口罩，如出现症状，应及时就医。
（2） 野外气雾免疫法：菌苗用量主要以动物数量而定。以1000只规模的羊群为例，每只羊免疫剂量为50亿活菌则需50000亿，用500ml灭菌生理盐水稀释。实际应用时疫苗用量要比计算用量高5－10％。免疫时将羊群赶入四周有矮墙的圈内。操作人员手持喷头，站在畜群中，喷头与动物头部同高，朝动物头部方向喷射。操作人员要随时走动，使每一动物都有吸入机会。如遇微风，还须注意风向，操作者应站在上风，以
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免雾化粒子被风吹走。喷射完毕，让动物在圈内停留数分钟即可放出。
进行野外气雾免疫时，操作者更需注意个人防护，应穿工作衣裤和胶靴，戴大而厚的口罩，如出现症状，应及时就医。
本法优点是省时、省力，免疫效果优良，适于群体动物免疫；缺点是疫（菌）苗用量大、容易诱发呼吸道感染，尤其在呼吸道疾病好发季节。 二、免疫接种用生物制品的保存、运送和用前检查
1．兽医生物制品保存：各种生物制品应保存在低温、阴暗及干燥场所，死菌苗、致弱菌苗、类毒素、免疫血清等应保存在2－15℃，防止冻结；弱毒疫苗，如猪瘟兔化弱毒疫苗、鸡新城疫弱毒疫苗等应置放在0℃以下冻结保存。
2．兽医生物制品运送：要求包装完善，防止碰坏瓶子和散播活的弱毒病原体，并尽快送到保存地点或预防接种的场所。弱毒疫苗应放在装有冰块的广口瓶内运送，以免其性能降低或丧失。
3．兽医生物制品用前检查：各种兽医生物制品在使用前，均需详细检查，不得使用没有瓶签或瓶签模糊不清、过期失效、瓶塞不紧或玻璃破裂的制品。 三、动物免疫接种注意事项
1．接种前健康检查：待免疫接种的动物必须营养和健康状况良好，饲养环境卫生清洁。营养状态差、患有内外寄生虫病或其他慢性病等动物免疫接种时副反应较大，应尽量避开。同时，从接种安全性和保证接种效果考虑，应对待接种动物进行临床检查，包括体温检查。
2．接种后动物护理和临床观察：动物在接种疫苗后有时会出现副作用，故在接种后要进行详细的临床观察，记录动物表现，期限为7－10天。发现动物异常，如严重的副作用时应及时采取必要的应急措施。
实验三 布氏杆菌常规血清学检测技术
目的：
1.掌握试管凝集试验检测布氏杆菌抗体的操作及结果判定方法。 2.了解布氏杆菌虎红平板凝集试验操作及其结果判定方法。 原理：凝集反应
细菌体的混悬液（抗原）与相应的免疫血清（抗体）互相作用时，在电解质（0.85%生理盐水）参与下，经过一定时间，颗粒抗原被凝集，形成肉眼可见的絮状或颗粒沉淀，称为凝集反应。 一、布氏杆菌试管凝集试验 1.试剂
①布氏杆菌试管凝集抗原 ②布氏杆菌标准阳性血清 ③布氏杆菌标准阴性血清 ④被检血清
⑤稀释液：0.5％石炭酸生理盐水 2.实验步骤和程序
⑴确定被检血清的稀释度
牛、马和骆驼常用1:50、1:100、1:200、1:400四个稀释度 猪、山羊、绵羊和狗用1:25、1:50、1:100、1:200四个稀释度 ⑵被检血清的稀释和加入抗原的方法（以猪、狗为例） ①将5支试管排成一排编号后，第1管加入稀释液2.3ml，第2管不加，第3、4、
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兽医传染病学实验内容
