杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://www.hzhxbio.com RNAblood 超纯全血总RNA快速提取试剂盒
目录号：RN25 目录编号 RN2502 ?
适用范围：
适用于快速提取全血高纯度总RNA ?
试剂盒组成、储存、稳定性：﹢
保存 室温 4℃避光 室温 室温 室温 室温 室温 室温
包装单位 50次
试剂盒组成 10X红细胞裂解液RLB 裂解液RL 去蛋白液RE 漂洗液RW RNase-free H2O 70%乙醇
RNase-free吸附柱RA 收集管（2ml）
50次 25 ml 50 ml 25 ml
10 ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
10 ml
9ml RNase-free H2O
第一次使用前按说明加指定量乙醇
50个 50个
本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项： 1.
所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。
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2.
不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。裂解液RL可以常温运输，收到后4℃避光保存。 3.
避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 ? 1.
产品介绍：
第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 2.
所有离心步骤如未加说明，均在室温进行。使用转速可以达到13，000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 3.
裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 4.
考虑到环保问题，本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿，用户使用前需要自备氯仿。 5.
常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带，分别为~5Kb（28S），~2Kb（18S），条带亮度比值约为2：1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S，tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4，5条带也属于正常现象，如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。 6.
检测OD260/OD280吸光度比值时，RNA样品应该溶于TE后检测，如果用水稀释后检测，由于一般水离子强度和PH值低，会使OD280升高，从而使比值降低。 7. 8.
加入裂解液RL匀浆后，加氯仿前，样品可在 –60℃-70℃ 保存一个月以上。 关于DNA 的微量残留：
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一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留, 在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA残留（一般电泳EB染色紫外灯下观察不可见）影响不是很大, 如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时： 1)
选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。 2) 3) 4) ? ? ? 1.
选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。 将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。
在步骤去蛋白液RE漂洗后，直接在吸附柱RA上进行DNase I消化处理。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
提示：第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇! 使用前将10X红细胞裂解液RLB用DEPC处理水稀释到1X。
在适合大小的RNase free离心管中加入1体积（ 0.5-1.0ml）加入各种抗凝剂新鲜血液 (颠倒混匀后)和3体积的红细胞裂解液RLB,颠倒混匀,可轻弹管壁,确保混匀。 病人血样中白细胞数量可能大幅增加或者减少, 应该适当增加或者减少处理量。
2. 室温放置10分钟（期间应该颠倒轻弹混匀数次帮助裂解红细胞）。 如果RNA降解严重,可在冰上裂解,但是时间可长一些以充分裂解。
3. 12,000 rpm离心20秒，倒弃红色上清，并小心的尽可能多的吸弃上清（注意不要吸到管底的细胞团），留下完整的管底白细胞团。
离心后在管底应该见到白色的白细胞团，也可能有一些红细胞残片和白细胞团在一起，但是如果看到的是大部分的红色细胞团，说明红细胞裂解很不充分，应该再加入红细胞裂解液重悬细胞团后重复步骤2，3。
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RNAblood 超纯全血总RNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
