胶体金免疫层析法对呼吸道合胞病毒抗原快速检测结果分析

胶体金免疫层析法对呼吸道合胞病毒抗原快速检测结果分

析

伊 洁1， 肖 艳2， 刘亚昆3， 徐英春1

【摘 要】摘要：目的 分析胶体金免疫层析法对呼吸道合胞病毒（RS V）抗原快速检测的灵敏度和特异度。方法 用 RS V抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）对197例疑似 RS V感染患者的鼻咽抽吸物或鼻咽拭子标本进行检测，以反转录聚合酶链反应（R T-PC R）核酸检测结果为参考，比较胶体金免疫层析法对不同类型标本和不同年龄组患者的灵敏度。结果 197例患者标本中经R T-PC R检测，95例（48.2%）为阳性。以R T-PC R核酸检测结果为标准，胶体金免疫层析法的灵敏度和特异度分别是34.7%和100%。该方法对鼻咽抽吸物的阳性检出率较鼻咽拭子高（36.2%对8.6%，P＜0.01），鼻咽抽吸物标本的灵敏度明显高于鼻咽拭子（22.1%对12.6%）。RS V检出率与年龄呈负相关（P＜0.01），1岁以下患儿的阳性检出率最高（29.5%），而在＞5岁患儿中阳性检出率为0。结论 胶体金免疫层析法对1岁以下幼儿的鼻咽抽吸物中的 RS V有较好检测效果，可辅助临床进行早期筛查。但鉴于该方法灵敏度较低，且适用于5岁以下儿童，临床上还需用 R T-PC R对 RS V 进行确认和补充检测，以免漏诊。

【期刊名称】中国感染与化疗杂志 【年(卷),期】2015(000)001 【总页数】4

【关键词】呼吸道合胞病毒； 抗原快速检测； 胶体金免疫层析法； 反转录聚合酶链反应

·论著·

呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RS V）是婴幼儿急性下呼吸道感染的重要病原体之一，可引起婴幼儿尤其是新生儿较高的病死率［1］。快速检测RS V对疾病的及时诊断和预防医院感染有着非常重要的作用。目前针对 R S V的检测方法主要有病毒培养、抗原检测、病毒核酸扩增和免疫荧光等方法［2］，其中核酸扩增方法有较高的灵敏度，日渐成为 RS V 检测的主要方法之一［3-4］。核酸检测阳性并不能确证病原体的感染，而抗原的检出有助于确证病原的感染，但其灵敏度和特异度尚待评估。本研究以核酸检测结果为参考，对一种以R S V抗原检测为基础的胶体金免疫层析法试剂盒的灵敏度和特异度进行评估，为临床RS V的早期快速筛查提供可参考的数据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 研究对象 研究对象由3部分组成。第1部分来自于中国医学科学院病原生物学研究所2012年1—7月保存的59例患者标本，其中34份为2012年1—7月采集的诊断为肺炎的住院患儿鼻咽抽吸物标本，患儿平均年龄为7个月，其中27份为男性患儿标本，7份为女性患儿标本。剩余25份为2012年1—2月采集的诊断为上呼吸道感染的成人患者的鼻咽拭子标本，患者平均年龄36岁，其中12份为男性患者标本，13份为女性患者标本。第2部分来自于北京协和医院于2012年9月—2013年12月采集的61例诊断为肺炎的住院患者的鼻咽拭子标本，包括46例患儿和15例成人患者。患儿平均年龄为20个月，其中25份为男性患儿标本，21份为女性患儿标本。成人患者的平均年龄为55岁，其中男性患者的标本为8份，女性患者的标本为7份。第3部分为北京市

大兴妇幼保健院于2013年12月采集的77例诊断为上呼吸道感染的门诊患儿标本，包括57份鼻咽拭子标本和20份鼻咽抽吸物标本。患儿平均年龄为27.1个月，其中男性患儿标本为41份，女性患儿标本为36份。采集的标本均置于3 m L病毒保存液的专用标本管中保存。

1.1.2 主要试剂 核酸提取试剂盒为 QIA G E N公司产品（QIAa m p MinElute Virus Spin Kit，Cat. 57704，德国）；反转录聚合酶链反应（R T-PC R）采用SuperScript. Ⅲ First-Strand Synthesis System（Invitrogen，Cat.18080-051，美 国）试剂；Binax N O WR S V试剂盒为美国Binax N O W 公司产品。 1.2 方法

1.2.1 Binax N O WR S V检测 按照检测说明书进行操作，新采集的标本直接滴到试纸条上进行检测，冻存的标本解冻后直接滴到试纸条上进行检测，等待15 min即可观察结果，当试纸条判定部 T、C处都确认有条带时，结果判为阳性。同时将检测余下的标本分装后于-80℃低温冰箱保存，集中进行核酸检测。 1.2.2 R S V核酸检测 采用一步法R T-PC R方法进行 R S V核酸的检测［5］，P C R产物经2%琼脂糖凝胶电泳分析，阳性产物进行测序验证。

1.2.3 统计学方法 采用SPSS 17.0统计学软件对结果进行统计分析，胶体金免疫层析试剂盒与R T-PCR的检测结果比较采用一致性检验；该试剂盒对不同类型标本的灵敏度用卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义；检测结果与年龄的相关性用Spearman相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胶体金免疫层析法检测与 R T-P C R核酸检测的比较

197例疑似R S V的鼻咽拭子和鼻咽抽吸物标本，经 R T-P C R 核 酸检测确认