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检验操作规程
题目：决明子原药材检验操作规程 编号：TS-GC-YL-20350-02 制定人： 制定日期2024 年 月 日 版本：2 页数：1/4 审核人： 审核日期2024 年 月 日 颁发部门：质 量 部 批准人： 批准日期2024年 月 日 生效日期2024 年 月 日 目的：规范决明子原药材检验操作 范围：决明子原药材检验 分发部门： 质量部、 化验室、生产部 标 题 正 文 1 标准依据：《中国药典》2024年版一部及四部 2 【性状】 2.1 仪器：直尺。 2.2 方法：取本品,置日光下观察,并用直尺测量:决明 略呈菱方形或短圆 柱形，两端平行倾斜，长3～7mm，宽2～4mm。表面绿棕色或暗棕色，平滑有光泽。―端较平坦，另端斜尖，背腹面各有1条突起的棱线，棱线两侧 各有1条斜向对称而色较浅的线形凹纹。质坚硬，不易破碎。种皮薄，子 叶2，黄色，呈“S”形折曲并重叠。气微，味微苦。 小决明 呈短圆柱形，较小，长3～5mm，宽2～3mm。表面棱线两侧各 有1片宽广的浅黄棕色带。 【鉴别】 3 （1）显微鉴别 3.1 仪器与试剂：生物显微镜、酒精灯，水合氯醛、稀甘油等。 3.1.1 方法：取本品适量，用水合氯醛装片，置显微镜下观察：（1）本品粉 3.1.3 末黄棕色。种皮栅状细胞无色或淡黄色，侧面观细胞1列，呈长方形，排 列稍不平整，长42～53μm，壁较厚，光辉带2条；表面观呈类多角形，壁 稍皱缩。种皮支持细胞表面观呈类圆形，直径10～35（55）μm，可见两个 同心圆圈；侧面观呈哑铃状或葫芦状。角质层碎片厚11～19μm。草酸钙簇 晶众多，多存在于薄壁细胞中，直径8～21μm。 (2)薄层鉴别 3.2 3.2.1 仪器与试剂：分析天平、数显恒温水浴锅、电热鼓风干燥箱、层析缸、硅胶G 薄层板、石油醚（60～90℃）、乙酸乙酯、5%香草醛硫酸溶液、决 明子对照药材等。 方法：（2）取本品粉末1g，加甲醇10ml，浸渍1小时，滤过，滤液蒸 3.2.2 干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷 却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml 使溶解，作为供试品溶液。另取橙黄决明素对照品、大黄酚对照品，加无 水乙醇-乙酸乙酯（2：1）制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶 液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点 于同一硅胶H薄层板上，以石油醚（30～60℃）-丙酮（2：1）为展开剂， 展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相 同颜色的斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为亮黄色（橙黄决明素）和粉红 色（大黄酚）。 【检查】 4 水分 不得过15.0%（通则0832第二法）。 4.1
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仪器：电热鼓风干燥箱、分析天平、粉碎机、药筛等。 方法：取供试品2-5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在100－105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中的含水量（%）。 计算公式： W样+W0－W1 水分% = ×100% W样 式中： W0 称量瓶的重量（g）。 W1称量瓶与样品的重量（g）。 W样样品的重量（g）。 4.2 总灰分 不得过5.0%（通则2302）。 4.2.1 仪器：粉碎机、药筛、分析天平、坩埚、箱式电阻炉等。 4.2.2 方法：取供试品2～3g，过二号筛混合均匀后，置炽灼至恒重的坩埚中称 定重量，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～ 600℃，使完全灰化至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。 4.2.3 计算公式： W1-W0 总灰分% = ×100% W样 式中： W0 ----------- 坩埚重量(g)。 W1----------- 坩埚与灰分的重量(g)。 W样----------- 样品的重量(g)。 黄曲霉毒素 照真菌毒素测定法（通则2351）测定。 4.3 本品每1000g含黄曲霉毒素B1不得过5μg，黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素 G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉毒素B1的总量不得过10μg。 4.3.1 仪器与试剂：光化学衍生器、离心机、荧光检测器检测等 本法系用高效液相色谱法（通则0512）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒 素（以黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2总 量计），除另有规定外，按下列方法测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲 醇-乙腈-水（40:18:42）为流动相；采用柱后衍生法检测，①碘衍生法：衍 生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释 至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃；②光化 ---------------------------- --------------------------- --------------------------- 4.1．1 4.1.2 4.1.3 第 2 页 共 5 页
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4.2.3 4.2.4 4.4 4.4.1 4.4.2 学衍生法：光化学衍生器（254nm）；以荧光检测器检测，激发波长λex=360nm（或365nm），发射波长λex=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。 混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为贮备溶液。精密量取贮备溶液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。 供试品溶液的制备 取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，置于均质瓶中，加入氯化钠3g，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 测定法 分别精密吸取上述混合对照品溶液5μl、10μ1、15μl、20μl、25μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液20～25μ1，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的量，计算，即得。 (A供?b)?f?1000计算公式：X= k?M样?V二氧化硫残留量：照二氧化硫残留量测定法（通则 2331)测定，不得过150mg/kg 仪器与试剂：两颈圆底烧瓶、电热套、竖式回流冷凝管、磁力搅拌器、分析天平、甲基红乙醇溶液指示剂、氢氧化钠滴定液滴、盐酸溶液（6mol/L)等。 方法：测定法取药材或饮片细粉约10g(如二氧化硫残留量较髙，超过1000mg/kg，可适当减少取样量，但应不少于5g),精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水300?400ml。打开回流冷凝管开关给水，将冷凝管的上端二氧化硫气体导出口处连接一橡胶导气管置于100ml锥形瓶底部。锥形瓶内加第 3 页 共 5 页
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4.4.3 5 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6
入3%过氧化氢溶液50ml作为吸收液（橡胶导气管的末端应在吸收液液面以下）。使用前，在吸收液中加人3滴甲基红乙醇溶液指示剂（2.5mg/ml),并用0.Olmol/L氢氧化钠滴定液滴定至黄色（即终点；如果超过终点，则应舍弃该吸收溶液）。开通氮气，使用流量计调节气体流量至约0.2L/min；打开分液漏斗的活塞，使盐酸溶液（6mol/L)10ml流入蒸馏瓶，立即加热两颈烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸；烧瓶内的水沸腾1.5小时后，停止加热。吸收液放冷后，置于磁力搅拌器上不断搅拌，用氢氧化钠滴定（O.Olmol/L)滴定，至黄色持续时间20秒不褪，并将滴定的结果用空白实验校正。 计算公式： 6 （V供-V空）×C×0.032×10 二氧化硫残留量（mg/kg） = W供 式中： V供为供试品溶液消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； V空 为空白消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； C 为氢氧化钠滴定液的浓度，mol/L； W供为供试品的重量，g。 0.032为lml氢氧化钠滴定液（lmol/L)相当的二氧化硫的质量，g。 【含量测定】 照高效液相色谱法（通则0512）测定。本品按干燥品计算，含大黄酚（C15H10O4）不得少于0.20%，含橙黄决明素（C17H14O7）不得少于0.080%。 仪器与试剂：分析天平、高效液相色谱仪、无水乙醇、乙腈、大黄酚对照品、橙黄决明素对照品、乙酸乙酯、甲醇、三氯甲烷、超声波清洗仪等。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为284nm。理论板数按橙黄决明素峰计算应不低于3000。 时间（分钟） 流动相A（%） 流动相B（%） 0～15 40 60 15～30 40→90 60→10 30～40 90 10 对照品溶液的制备 取大黄酚对照品、橙黄决明素对照品适量，精密称定，加无水乙醇-乙酸乙酯（2：1）混合溶液制成每1ml含大黄酚30μg、橙黄决明素20μg的混合溶液，即得。 供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，加稀盐酸30ml置水浴中加热水解1小时，立即冷却，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣用无水乙醇-乙酸乙酯（2：1）混合溶液使溶解，转移至25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含大黄酚（C15H10O4）不得少于0.20%，含橙黄决明素（C17H14O7）不得少于0.080%。 第 4 页 共 5 页
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5.7 计算公式： A样 × C对 ×f 含量% = ×100% m ×（1－水分）×A对 式中： A样 ------------------------- 样品的面积。 A对 ------------------------ - 对照品的面积。 C对 ------------------------- 对照品的浓度(mg/ml)。 m ------------------------- 样品的重量（g）。 f ------------------------- 稀释体积。
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