用SDS_十二烷基磺酸钠_凝胶电泳法测定水解丝蛋白的分子量

用SDS_十二烷基磺酸钠_凝胶电泳法测定水解丝蛋白的分

子量

用 SDS( 十二烷基磺酸钠) 凝胶电泳法 测定水解丝蛋白的分子量 吴斗思卢淑琴

( ) 天津纺织工学院材料科学系 ,邮编 300160

摘要 用改进的 SDS 凝胶电泳法对实验室生产的水解丝蛋白产品的分子量进行了测定 。测定表明该产品分子量分布在 43000,2900 的范围 ,分子量在 10000 以下的低分子蛋白成分含量高于 50 % 。 关键词 SDS 凝胶电泳法 ,水解丝蛋白 ,分子量测定

Eq 蚕丝中的丝素蛋白具有特殊的蛋白螺旋结构 ,与v = πη6rd ( ) 自然的保湿原子 N M F相近似 ,对皮肤有良好的保

() q 为分子 或离子所带净余电荷 , E 为两电极间电位湿作用和保香效果 。随着人们生活质量的提高和消

η差 , d 为两电极间距离 , r 为球形分子的半径 ,为溶 费的需要 , 丝素蛋白质在日化领域得到了较好的开

液的粘度 。 发 ,用丝素蛋白作为特种功用添加剂制造的膏 、霜 、 ( 从上述表示式可知 ,在其他条件 电场 、介质粘度露 、液等洗发 、护肤化妆品受到消费者的普遍喜爱 。

) 等不变情况下 ,蛋白质在凝胶中的迁移速率受分子 用于化妆品的优质丝素蛋白质应是分子量在 10000

所带净电荷量与分子大小两个因素的影响 。如果两 以下的小分子水解蛋白 ,因小分子量蛋白可被毛发吸

种不同分子量的蛋白质的分子大小的差异被所带净 收 ,起到营养毛发等作用 。我们对丝素水解进行了研

电荷量的差异所补偿时 ,则这两种不同分子量的蛋白究并对水解丝素产品进行了分子量测定 。

质可以相同的速率电泳 ,这将无法通过电泳距离测定 (蛋白质分子量测定较多用的是 SDS 十二烷基磺

蛋白质的分子量 。为了解决这一问题 ,人们经过长期 ) 酸钠凝胶电泳法 ,这种方法最适宜的测定分子量是

() 的研究发现 ,在 SDS 十二烷基磺酸钠存在下蛋白质15000,100000 的样品 ,对低于 10000 分子量的水解 的电泳速率和它们的分子量的对数成直线关系 。其 蛋白不太适用 。通过改进 ,用强电解质离子为前导离 理由是 SDS 能与蛋白质的疏水区相结合并把绝大部 子和拖尾离子 ,可对分子量低于 10000 的水解蛋白样 分蛋白质分离成它们的组成亚单位 。SDS 的结合还

品进行分子量测定 。 使变性的 、随机盘曲的多肽链得到大量负电荷 ,这种 负电荷基本上掩盖了无 SDS 存在时正常带有的任何 1 用 SDS 凝胶电泳法测定蛋白质分子量的理电荷 ,就是说 ,使不同大小分子量的蛋白质都带上基

论依据本相同的电荷 ,所以使得蛋白质分子的电泳速率和分 子量的大小有了一定的关系 : 分子量大 ,泳动迁移率 蛋白质分子中同时含有羧基和氨基 ,羧基可给出 + + 小 ;分子量小 ,迁移率大 ,具体为上述 lg M —d 直线关 氢离子 H , 氨基可接受 H , 故 蛋 白 质 具 有 两 性 性 系 。 质 。蛋白质中的羧基和氨基可互相作用形成双极离 在用 SDS 凝胶电泳法测定蛋白质的分子量时需 + 子 。在 H 浓度大的溶液中蛋白质以正离子存在 ; 而 同时至少用 3,4 种标准蛋白质 ,这几种蛋白质的分 - 在 O H 浓度大的溶液中蛋白质以负离子形式存在 。 子量有

的应高于待测蛋白质 , 有的应低于待测蛋白 若溶液的 p H 值为某一数值时蛋白质以中性的双极

离子形式存在 ,这个 p H 值称为蛋白质的等电点 。等

电泳完成后立即取出凝胶并在染料前沿做标记 , 2 实验 然后直接将胶浸入染色液中染色 ,染 1 h 左右 ,取出凝

胶浸入脱色液中脱色 ,直至凝胶本底色带清晰 。211 仪器 夹心式垂直电泳槽配套装置 。3 结果和讨论 212 药品

() 21211 分离胶缓冲液 1 号液一共进行了 30 余次制胶电泳实验 ,测定了近百

( ) 三羟甲基氨基甲烷 Tris,浓度 1 mol/ L , SDS 浓 个不同实验条件下生产的样品 。因为每次电泳实验

度 012 % ,浓硫酸调至 p H = 718 。 的条件会略有不同 ,所以每作一个或几个样品 ,必须

() 21212 分离胶贮存液 2 号液同时作标准样品 ,以便根据标准样品画出 lg M —d 直

1711g 丙烯酰胺 ,019gN ,N′2甲叉双丙烯酰胺 ,加 线确定待测样品的分子量 。

蒸馏水至体积为 50 ml ,过滤备用 。 图 1 显 示 的 是 一 次 电 泳 实 验 结 果 。凝 胶 厚 度

() 21213 样品缓冲液 3 号液115 mm ,电泳电流 20 mA ,全程电泳时间 6 h25 min 。胶

SDS 浓度 1 % ,尿素浓度 8 mol/ L ,巯基乙醇浓度槽 5 加 的 是 标 准 蛋 白 样 品 , 分 子 量 组 成 是 94000 、