龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn
以TNF—α刺激A549细胞构建急性肺损伤细胞模型
作者：吴炜景 张家敏 李立平 来源：《中国医药科学》2017年第17期
[摘要]目的构建急性肺损伤体外细胞模型。方法以TNF-α 10ng/mL刺激肺泡Ⅱ型上皮A549细胞，采用酶联免疫吸附法检测细胞上清液中IL-4、IL-1 B浓度，比色法检测丙二醛浓度、总超氧化物歧化酶活力，RT-PCR及免疫印迹法分别检测NF-K B mRNA及蛋白的表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果以TNF-α刺激A549细胞，细胞上清液IL-1β、IL-4浓度上升；细胞内丙二醛增多，超氧化物歧化酶活力下降；NF-кB在基因及蛋白水平表达上调（P
[关键词]急性肺损伤；细胞模型；炎症反应；肺泡Ⅱ型上皮细胞；核因子кB； [中图分类号]R563.1；R563.8 [文献标识码]A [文章编号]2095-0616（2017）17-30-03 急性肺损伤（acute lung iniury，ALI）是临床常见急危重症，以进行性加重的呼吸困难、顽固的低氧血症为临床特征，其严重阶段可发展为成人呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）。感染、有害物质吸入、外伤、休克、中毒等多种非心源性致病因素是引起急性肺损伤的常见因素，ALI/ARDs缺乏特效治疗，发病率及病死率均处于高水平，因而其发病机制研究仍受科学家重视。急性肺损伤模型构建是ALI机制研究的基础，在细胞模型上进行研究，再将实验成果在动物模型上进行验证，有利于降低动物实验的成本，提高成功率。本研究结合急性肺损伤发生时，肺泡Ⅱ型上皮细胞在炎症反应、氧化应激、细胞凋亡、通路激活等方面的特点，对ALI细胞模型的构建进行探讨。 1材料与方法 1.1材料
A549细胞由福建医科大学附属第二医院中心实验室提供，RPMI-1640培养基、小牛血清、胰酶来自于Hyclone公司，重组人肿瘤坏死因子-α购自美国的Pepro Tech公司，NF-кB抗体、内参βactin抗体购自美国CST公司，Trizol购买于Invitrogen公司，PCR引物由上海英骏公司合成，RT-PCR及荧光定量PCR试剂购自TaKaRa公司，细胞因子IL-4、IL-1 β ELISA法检测试剂盒、RIPA细胞裂解液、SOD及MDA检测试剂盒、BCA法蛋白浓度测定试剂盒购自江苏碧云天公司。AnnexinV/PI细胞凋亡检测试剂盒购自美国BD公司。 1.2细胞培养及实验分组
以TNF—α刺激A549细胞构建急性肺损伤细胞模型
